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qianqxiao

新虫 (初入文坛)

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[求助] 荧光定量引物pcr引物设计验证

要同时做多个基因的定量，计划是选择染料法，利用内参基因，采用相对定量的方法。

设计多对引物时，要考虑让各对引物的Tm值接近吗？扩出来的片段大小要相近吗？
如果各对引物的最佳反应条件不一致，同时做多个基因的定量，是不是会对结果有影响？

还有引物的验证问题，验证步骤是这样吗：
普通pcr后跑胶，切胶，胶回收，测序，与目的基因拟扩增片段比对。
荧光定量时，看溶解曲线，是否有引物二聚体。

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1楼 2015-12-09 13:01:10

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