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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 跑SDS-PAGE，跑完后没有条带，不知道是怎么回事
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lt840527

金虫 (小有名气)

[求助] 跑SDS-PAGE，跑完后没有条带，不知道是怎么回事 已有3人参与

跑9个样品的SDS-PAGE， 跑完了没有条带，如图所示，而且染色后stacking gel的颜色退不掉，不知有没有人遇到和我一样的情况，这是怎么搞的？我上样之前没有将样品离心，是不是样品把胶给堵了啊？望知道的告诉一下，谢谢！

跑SDS-PAGE，跑完后没有条带，不知道是怎么回事
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1楼 2014-07-19 11:25:41
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先说你这块胶做的却是不怎么好。你用什么染色啊？
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不作死不会死！！！
2楼2014-07-19 16:52:09
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
youlinglyw: 金币+2 2014-07-19 21:20:06
还有你是跑的蛋白还是核酸啊？样品没有离心是什么个意思，不离心样品是怎么做出来的啊？你的样品之前跑过没，还是这一次没有出来？你染色的时候为什么连浓缩胶一块染？
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不作死不会死！！！
3楼2014-07-19 16:56:01
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lt840527

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-07-19 16:52:09
首先说你这块胶做的却是不怎么好。你用什么染色啊？

我是用考马斯亮蓝染色的
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4楼2014-07-19 20:34:13
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lt840527

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-07-19 16:56:01
还有你是跑的蛋白还是核酸啊？样品没有离心是什么个意思，不离心样品是怎么做出来的啊？你的样品之前跑过没，还是这一次没有出来？你染色的时候为什么连浓缩胶一块染？

我跑的是蛋白，样品在煮了之后没有离心
之前也跑过一次，也是什么都没有
我以前都是浓缩胶一起染的
浓缩胶还要撕掉再染色吗？
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5楼2014-07-19 20:36:35
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79377

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lt840527: 金币+10, ★★★很有帮助, 可能是，谢谢！那一般怎么提高样品溶解度呢？加SDS？ 2014-07-20 22:44:49
你的样品是不是全挤到上层胶了？看你下层胶没蛋白，上层胶倒是染色很深，估计样品不溶或者根本跑不下去吧。想办法提高一下样品溶解度

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-07-20 07:56:32
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neon_alone

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lt840527: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！蛋白是从细胞提出来的。 2014-07-20 22:45:44
1.先确定你跑的蛋白是哪里提出来的？细胞，细菌还是什么的？需要确定浓度，而且上样之前最好１００００ｇ离心１分钟，否则就算跑出来胶也不好看会有颗粒什么。
２.上样量一般在６０ｕｇ以内，我觉得，太多了就跑不动了
３.确定不是你自己蛋白跑太久跑丢了。
４.染色把浓缩胶切掉不要
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7楼2014-07-20 18:33:43
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