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lt840527

金虫 (小有名气)

[求助] 跑SDS-PAGE,跑完后没有条带,不知道是怎么回事 已有3人参与

跑9个样品的SDS-PAGE, 跑完了没有条带,如图所示,而且染色后stacking gel的颜色退不掉,不知有没有人遇到和我一样的情况,这是怎么搞的?我上样之前没有将样品离心,是不是样品把胶给堵了啊?望知道的告诉一下,谢谢!

跑SDS-PAGE,跑完后没有条带,不知道是怎么回事
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先说你这块胶做的却是不怎么好。你用什么染色啊?
不作死不会死!!!
2楼2014-07-19 16:52:09
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
youlinglyw: 金币+2 2014-07-19 21:20:06
还有你是跑的蛋白还是核酸啊?样品没有离心是什么个意思,不离心样品是怎么做出来的啊?你的样品之前跑过没,还是这一次没有出来?你染色的时候为什么连浓缩胶一块染?
不作死不会死!!!
3楼2014-07-19 16:56:01
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lt840527

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-07-19 16:52:09
首先说你这块胶做的却是不怎么好。你用什么染色啊?

我是用考马斯亮蓝染色的
4楼2014-07-19 20:34:13
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lt840527

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-07-19 16:56:01
还有你是跑的蛋白还是核酸啊?样品没有离心是什么个意思,不离心样品是怎么做出来的啊?你的样品之前跑过没,还是这一次没有出来?你染色的时候为什么连浓缩胶一块染?

我跑的是蛋白,样品在煮了之后没有离心
之前也跑过一次,也是什么都没有
我以前都是浓缩胶一起染的
浓缩胶还要撕掉再染色吗?
5楼2014-07-19 20:36:35
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79377

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lt840527: 金币+10, ★★★很有帮助, 可能是,谢谢!那一般怎么提高样品溶解度呢?加SDS? 2014-07-20 22:44:49
你的样品是不是全挤到上层胶了?看你下层胶没蛋白,上层胶倒是染色很深,估计样品不溶或者根本跑不下去吧。想办法提高一下样品溶解度

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-07-20 07:56:32
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neon_alone

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lt840527: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢!蛋白是从细胞提出来的。 2014-07-20 22:45:44
1.先确定你跑的蛋白是哪里提出来的?细胞,细菌还是什么的?需要确定浓度,而且上样之前最好10000g离心1分钟,否则就算跑出来胶也不好看会有颗粒什么。
2.上样量一般在60ug以内,我觉得,太多了就跑不动了
3.确定不是你自己蛋白跑太久跑丢了。
4.染色把浓缩胶切掉不要
7楼2014-07-20 18:33:43
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