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huoxingyihao

新虫 (初入文坛)

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[求助] 枯草基因组为模板，pcr没有东西？已有1人参与

基因组没有问题，换了两个引物，第一个引物是有一些杂带，但是没有我要的带，第二个引物直接什么也p不出来，目的条带应该一千多？会是什么原因呢？

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1楼 2014-07-04 22:10:58

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考拉003

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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huoxingyihao: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-08-27 16:13:32

额，你这个还真不知道怎么说，你只有试试看了
1，模板是提取的基因组还是做菌落PCR，我们实验室现在做PCR常用EP管装30Ul无菌水将划线的菌挑一点，沸水煮10分钟，PCR效果非常，你可以试试；
2，其次看你的体系有没有问题，这个应该没啥问题的
3，引物的特异性强不强，采用软件设计引物除了看得分外还看引物之间会不会形成二聚体之类的，发夹结构什么的。
4，你说的1Kb的带应该不是很大，引物多长？20碱基左右吗？引物太长退火时的时间考虑增加一下，并且退火温度做个梯度，52——58度试试吧。
PCR似乎是个最基本的克隆技术，引物是很重要的，主要关注一下引物和退火温度及时间吧。

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