24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1459  |  回复: 2
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

博克侬浮码

银虫 (小有名气)

[求助] 载体是否自连 已有2人参与

最近在做克隆,但是出现了好多问题,请教各位前辈,给予帮助,不胜感激!!
1.引物-F-CAGT---------------------TTGT
           R-ATCC---------------------AATG
这对引物的扩增产物是否与PGEM-Teasy 载体连接


2.用上述引物扩增的目的片段与T载体连接后挑白斑,扩PCR后条带非常亮,但是所提取的质粒片段大于目的基因与载体连在一起的片段,单酶切也没有出现目的条带
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

1. 引物的扩增产物是否与PGEM-Teasy 载体连接
如果你用的是Taq酶扩增出来的,可以直接和pGEM T-easy,如果是高保真酶扩增出来的,需要先加A后,再和pGEM T-GEM连接

2. 扩PCR后条带非常亮
你是用什么引物做菌落PCR的,如何来排除假阳性的

3. 但是所提取的质粒片段大于目的基因与载体连在一起的片段,单酶切也没有出现目的条带
因为你的载体没有线性化,所以不好从大小上进行判断,单酶切也没有出现目的条带可能是因为你载体上只有一个这个位点
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-07-16 10:56:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-07-05 18:59:09
我也是刚刚做这个,直接做了个菌落PCR,就送出去测序了,纠结于是否自连还不如直接送几个样预测序一下,省时间
2楼2014-07-04 10:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考博] 求博导|生物质基多孔碳/超级电容方向,已有相关成果,寻能源材料/碳材料方向老师 +3 猪猪人Zzz 2026-04-12 3/150 2026-04-17 19:10 by 阳阳阳^_^
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 211本科材料化工求调剂 +19 YHLAH 2026-04-11 23/1150 2026-04-14 22:25 by fenglj492
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[考研] 271求调剂 +35 2261744733 2026-04-11 41/2050 2026-04-14 15:36 by zs92450
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 0854调剂 +10 长弓傲 2026-04-11 11/550 2026-04-13 10:38 by wp06
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 求调剂,一志愿材料科学与工程985,365分, +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见