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静静的泪滴

铜虫 (初入文坛)

[求助] 我想问一下如果用三条引物同时去扩增一个目的基因。结果会怎样？ 已有2人参与

我想问一下如果我设计三条引物，一对是通用引物。然后在模版链其中一条链的中间在设计一个特异引物。然后将这三个引物同时加到反应体系中，PCR产物会有几种？为什么？
假设，我PCR所用的酶同时具有5‘-3聚合酶活性和5’-3'外切酶活性。
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1楼 2014-07-02 11:01:37
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静静的泪滴

铜虫 (初入文坛)
请大婶们帮忙啊~~~！！！
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2楼2014-07-02 11:29:42
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-02 15:37:52
如果你的引物的3‘端没有任何修饰的话，PCR采用的酶比较好，模板， 引物足量的话可以扩增出两条带，相当于简单的多重PCR，但是前提是你的引物设计的好
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rainwater
3楼2014-07-02 13:54:13
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
静静的泪滴(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-04 08:53:04
内部的特异引物可以和通用引物的一条组成特异引物对。产物的多少还是主要看引物的质量和扩增效率如何。
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学习使你立于不败之地
4楼2014-07-02 17:21:34
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静静的泪滴

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-02 13:54:13
如果你的引物的3‘端没有任何修饰的话，PCR采用的酶比较好，模板， 引物足量的话可以扩增出两条带，相当于简单的多重PCR，但是前提是你的引物设计的好

谢谢~是的 确实是两条带  现在我想把中间的那条引物固定在与模版结合的位置，让它既不会被聚合酶的外切活性降解，也不会往下延伸。请问都有哪些方法呢？
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5楼2014-07-03 17:12:13
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静静的泪滴

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-07-02 17:21:34
内部的特异引物可以和通用引物的一条组成特异引物对。产物的多少还是主要看引物的质量和扩增效率如何。

现在我想把中间的那条引物固定在与模版结合的位置，让它既不会被聚合酶的外切活性水解，也不会往下延伸。请问都有哪些方法呢？麻烦指点一下
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6楼2014-07-03 17:13:39
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以尝下改变退火温度（引物的TM值）。
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学习使你立于不败之地
7楼2014-07-03 20:46:46
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呵呵987

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-02 14:54:13
如果你的引物的3‘端没有任何修饰的话，PCR采用的酶比较好，模板， 引物足量的话可以扩增出两条带，相当于简单的多重PCR，但是前提是你的引物设计的好

PCR后总是大片段条带亮，小片段条带弱，如何修改PCR条件使得小条带也相对亮些
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8楼2018-07-24 10:55:01
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xuyuzhi

新虫 (正式写手)
一道生物支持你
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17343151072目前在一道生物，常联系
9楼2018-07-26 16:50:09
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