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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » BL21(DE3)表达乳糖酶
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] BL21(DE3)表达乳糖酶 已有2人参与

BL21（DE3）可以用来表达乳糖酶吗？文献里大部分都是用这个宿主菌表达的，可是这个菌的LacZ是完整的，不会干扰乳糖酶的表达吗？
PS：表达时将pET28a(+)和pCold I这两个质粒转入作为对照，也是可以测出乳糖酶的酶活的，如果可以表达乳糖酶，最终酶活计算要减掉空载体测出的酶活吗？
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1楼 2014-06-30 18:16:26
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
夏天的普洱茶(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-07-01 11:23:58
转：
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
我感觉是不会干扰乳糖酶表达的。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-07-01 09:50:45
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-07-01 09:50:45
转：
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
我感觉是不会干扰 ...

这个我也看到了，我的意思是BL21不转化也是能产少量乳糖酶的，这个不会和所表达的酶相互影响吗？
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3楼2014-07-01 11:52:36
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-07-01 11:52:36
这个我也看到了，我的意思是BL21不转化也是能产少量乳糖酶的，这个不会和所表达的酶相互影响吗？...

我感觉他自身产生的可以忽略不计的，量非常非常少，检测不到基本上
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
4楼2014-07-01 17:10:54
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
夏天的普洱茶: 金币+17, ★★★★★最佳答案 2014-07-02 09:36:11
大肠杆菌表达宿主，应该都有乳糖酶表达，至于活性高低与否，这个要进行代谢组分析，实在太麻烦了，你计算的时候直接减掉空载体对照应该就行了
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显微镜下的世界很精彩！
5楼2014-07-01 21:37:17
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by asznpb at 2014-07-01 21:37:17
大肠杆菌表达宿主，应该都有乳糖酶表达，至于活性高低与否，这个要进行代谢组分析，实在太麻烦了，你计算的时候直接减掉空载体对照应该就行了

噢，这个样子，谢谢
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6楼2014-07-01 21:58:08
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