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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] BL21(DE3)表达乳糖酶 已有2人参与

BL21(DE3)可以用来表达乳糖酶吗?文献里大部分都是用这个宿主菌表达的,可是这个菌的LacZ是完整的,不会干扰乳糖酶的表达吗?
PS:表达时将pET28a(+)和pCold I这两个质粒转入作为对照,也是可以测出乳糖酶的酶活的,如果可以表达乳糖酶,最终酶活计算要减掉空载体测出的酶活吗?
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
夏天的普洱茶(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-07-01 11:23:58
转:
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
我感觉是不会干扰乳糖酶表达的。
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-07-01 09:50:45
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-07-01 09:50:45
转:
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
我感觉是不会干扰 ...

这个我也看到了,我的意思是BL21不转化也是能产少量乳糖酶的,这个不会和所表达的酶相互影响吗?
3楼2014-07-01 11:52:36
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-07-01 11:52:36
这个我也看到了,我的意思是BL21不转化也是能产少量乳糖酶的,这个不会和所表达的酶相互影响吗?...

我感觉他自身产生的可以忽略不计的,量非常非常少,检测不到基本上
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
4楼2014-07-01 17:10:54
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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夏天的普洱茶: 金币+17, ★★★★★最佳答案 2014-07-02 09:36:11
大肠杆菌表达宿主,应该都有乳糖酶表达,至于活性高低与否,这个要进行代谢组分析,实在太麻烦了,你计算的时候直接减掉空载体对照应该就行了
显微镜下的世界很精彩!
5楼2014-07-01 21:37:17
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by asznpb at 2014-07-01 21:37:17
大肠杆菌表达宿主,应该都有乳糖酶表达,至于活性高低与否,这个要进行代谢组分析,实在太麻烦了,你计算的时候直接减掉空载体对照应该就行了

噢,这个样子,谢谢
6楼2014-07-01 21:58:08
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