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zhuangkai520金虫 (小有名气)
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[求助]
定量 扩增效率变低了怎么回事 已有1人参与
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| 以前好好的， 现在扩增效率突然变到50%多，引物换过，质粒也重新提取过？难道是takara的试剂问题？？ |
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4楼2014-07-01 07:59:31
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
zhuangkai520: 金币+20, ★有帮助 2014-06-30 15:31:11
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流经验！ 2014-07-01 17:12:40
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有这样的几种可能：反应试剂中部分成分特别是荧光染料有降解；反应条件不够优化，可以适当降低退火温度或改为三步法扩增；pcr反应体系中有抑制物，一般是加入模板时引入，需要将模板稀释从而降低抑制物量。 我曾经有次是扩增效率在80%，主要考虑因为引物量少模板没有反应完全，然后经过多加了0.1ul的引物量而使扩增效率上去的。 希望对你有帮助 |
2楼2014-06-30 08:26:09
zhuangkai520
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3楼2014-06-30 15:30:59
zhuangkai520
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5楼2014-07-01 15:34:33
20