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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量 扩增效率变低了怎么回事
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)

[求助] 定量 扩增效率变低了怎么回事 已有1人参与

以前好好的， 现在扩增效率突然变到50%多，引物换过，质粒也重新提取过？难道是takara的试剂问题？？
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深圳的东北人
1楼 2014-06-29 16:04:56
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yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhuangkai520: 金币+20, ★有帮助 2014-06-30 15:31:11
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流经验！ 2014-07-01 17:12:40
有这样的几种可能：反应试剂中部分成分特别是荧光染料有降解；反应条件不够优化，可以适当降低退火温度或改为三步法扩增；pcr反应体系中有抑制物，一般是加入模板时引入，需要将模板稀释从而降低抑制物量。
我曾经有次是扩增效率在80%，主要考虑因为引物量少模板没有反应完全，然后经过多加了0.1ul的引物量而使扩增效率上去的。
希望对你有帮助
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2楼2014-06-30 08:26:09
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yzj926521 at 2014-06-30 08:26:09
有这样的几种可能：反应试剂中部分成分特别是荧光染料有降解；反应条件不够优化，可以适当降低退火温度或改为三步法扩增；pcr反应体系中有抑制物，一般是加入模板时引入，需要将模板稀释从而降低抑制物量。
我曾经 ...

我之前跑的时候是一样的东西，一样的DNA模板，是很好的扩增效率也在100%左右，过年放假回来就不行了，提高引物的浓度5倍后，扩增效率就增加到80%，我的试7月份过期，是不是这方面的原因呢？同样的试剂，使用别的引物，就好着呢。我完全没有头绪了
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深圳的东北人
3楼2014-06-30 15:30:59
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yzj926521

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhuangkai520 at 2014-06-30 15:30:59
我之前跑的时候是一样的东西，一样的DNA模板，是很好的扩增效率也在100%左右，过年放假回来就不行了，提高引物的浓度5倍后，扩增效率就增加到80%，我的试7月份过期，是不是这方面的原因呢？同样的试剂，使用别的引 ...

不好说呢，要不你再增加一下引物的量试一试
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4楼2014-07-01 07:59:31
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zhuangkai520

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yzj926521 at 2014-07-01 07:59:31
不好说呢，要不你再增加一下引物的量试一试...

估计我增加到6-7倍就可以了！！
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深圳的东北人
5楼2014-07-01 15:34:33
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