应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3173  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lixin123qq

木虫 (小有名气)

小小博士

[求助] 关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！ 已有3人参与

各位学长前辈你们好，我是天津工生所的学生，现在在做一个膜蛋白的表达纯化以及结构解析。由于经验不足，遇到各种问题，想请教下各位前辈~~
我们是采用大肠杆菌C43来对目的膜蛋白进行外源表达，我选择的是DDM来溶解细胞膜并提取膜蛋白（溶膜效果不错）。但是：
1. 在进行SDS-PAGE时，条带总是弥散状态（样品加入loading buffer后直接上样电泳，没有加热），用同样的loading buffer跑可溶蛋白，则没有弥散现象。这是什么原因呢？如何解决？弥散状态是否能说明蛋白以不均一状态存在？
2. 我们在得到纯度较好的蛋白后进行hampton screen 试剂盒筛选点晶，发现有很多条件下长出不很规则的圆球状颗粒，用捞晶环碰触，其质感不像晶体，有种“绵绵”的感觉，请问大家有遇到同样情况吗？这种颗粒是什么呢？是detergent？什么原因导致这种颗粒的形成呢？
3. 我手上还有另外一个膜蛋白，也是用DDM进行溶膜提取，Ni柱纯化后，4度放置一天则会发现其溶液呈烟雾状，这应该是蛋白不稳定导致的，遇到这种情况我该从哪些方面进行改善呢？
课题纠缠于这些问题不得进展，很是痛苦，希望各位前辈不吝赐教，不胜感激！

关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！
膜蛋白SDS-PAGE.jpg


关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！-1
球状颗粒.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-25 16:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐乐lelele

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by wacx33 at 2014-06-25 19:27:20
你那种晶体我以前也碰到过，不过我的是水溶性蛋白，我那时长的是白的那种圆状物，后来发现是盐晶。
关于蛋白会雾化，估计是不稳定，看看换换buffer能否增加稳定性，分装后直接冻存-80℃，再长晶体看看怎么样。
另 ...

你好，我是蛋白纯化的新手小白，想问一下膜蛋白跑SDS-PAGE胶前，为什么不能加热上样？
赞一下 回复此楼
5楼2018-08-06 21:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

wacx33

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-25 20:27:58
本帖内容被屏蔽
2楼2014-06-25 19:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1074799343

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也在长膜蛋白晶体，很是痛苦。也遇见跟你一样的情况，那种圆的是DDM 聚集。不是蛋白晶体。这个我可以百分之百确定，我长了很多都是这样的。
如果想要缓解的话，需要用100KD的浓缩管浓缩，使DDM聚集相对能少一点。但是蛋白也会减少，这是没办法的办法。
赞一下 回复此楼
3楼2016-01-08 20:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐乐lelele

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 1074799343 at 2016-01-08 20:05:46
我也在长膜蛋白晶体，很是痛苦。也遇见跟你一样的情况，那种圆的是DDM 聚集。不是蛋白晶体。这个我可以百分之百确定，我长了很多都是这样的。
如果想要缓解的话，需要用100KD的浓缩管浓缩，使DDM聚集相对能少一点。 ...

你好，我是蛋白纯化的新手小白，想问一下膜蛋白跑SDS-PAGE胶前，为什么不能加热上样？
赞一下 回复此楼
4楼2018-08-06 20:26:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料科学与工程调剂 +9 深V宿舍吧 2026-03-30 10/500 2026-03-31 00:10 by jp9609
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-30 7/350 2026-03-30 20:25 by 12022246319
[考研] 332求调剂 +14 032500 2026-03-25 14/700 2026-03-30 20:03 by 无际的草原
[考研] 一志愿：西北大学，英一数一408-284分求调剂 +5 12.27 2026-03-27 5/250 2026-03-30 19:31 by 源_2020
[考研] 289求调剂 +16 新时代材料 2026-03-27 16/800 2026-03-30 19:04 by Wang200018
[考研] 0703本科郑州大学求调剂 +7 nhj_ 2026-03-25 7/350 2026-03-30 12:44 by fangnagu
[考研] 282求调剂 +4 wcq131415 2026-03-24 4/200 2026-03-30 10:39 by Delta2012
[考研] 317求调剂 +10 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 10/500 2026-03-30 09:45 by longlotian
[考研] 考研调剂 +7 小蜡新笔 2026-03-29 7/350 2026-03-29 19:00 by 学员8dgXkO
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +14 zhubinhao 2026-03-27 14/700 2026-03-29 10:01 by Sjndkwm
[考研] 085600，专业课化工原理，321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 330分求调剂 +5 qzenlc 2026-03-29 5/250 2026-03-29 07:37 by 无际的草原
[考研] 320分，材料与化工专业，求调剂 +9 一定上岸aaa 2026-03-27 13/650 2026-03-28 15:00 by 神马都不懂
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 277分求调剂，跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭