应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3175  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lixin123qq

主管区长

小小博士

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！ 已有3人参与

各位学长前辈你们好，我是天津工生所的学生，现在在做一个膜蛋白的表达纯化以及结构解析。由于经验不足，遇到各种问题，想请教下各位前辈~~
我们是采用大肠杆菌C43来对目的膜蛋白进行外源表达，我选择的是DDM来溶解细胞膜并提取膜蛋白（溶膜效果不错）。但是：
1. 在进行SDS-PAGE时，条带总是弥散状态（样品加入loading buffer后直接上样电泳，没有加热），用同样的loading buffer跑可溶蛋白，则没有弥散现象。这是什么原因呢？如何解决？弥散状态是否能说明蛋白以不均一状态存在？
2. 我们在得到纯度较好的蛋白后进行hampton screen 试剂盒筛选点晶，发现有很多条件下长出不很规则的圆球状颗粒，用捞晶环碰触，其质感不像晶体，有种“绵绵”的感觉，请问大家有遇到同样情况吗？这种颗粒是什么呢？是detergent？什么原因导致这种颗粒的形成呢？
3. 我手上还有另外一个膜蛋白，也是用DDM进行溶膜提取，Ni柱纯化后，4度放置一天则会发现其溶液呈烟雾状，这应该是蛋白不稳定导致的，遇到这种情况我该从哪些方面进行改善呢？
课题纠缠于这些问题不得进展，很是痛苦，希望各位前辈不吝赐教，不胜感激！

关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！
膜蛋白SDS-PAGE.jpg


关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！-1
球状颗粒.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-25 16:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐乐lelele

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by wacx33 at 2014-06-25 19:27:20
你那种晶体我以前也碰到过，不过我的是水溶性蛋白，我那时长的是白的那种圆状物，后来发现是盐晶。
关于蛋白会雾化，估计是不稳定，看看换换buffer能否增加稳定性，分装后直接冻存-80℃，再长晶体看看怎么样。
另 ...

你好，我是蛋白纯化的新手小白，想问一下膜蛋白跑SDS-PAGE胶前，为什么不能加热上样？
赞一下 回复此楼
5楼2018-08-06 21:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

wacx33

专家顾问
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-25 20:27:58
本帖内容被屏蔽
2楼2014-06-25 19:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1074799343

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

我也在长膜蛋白晶体，很是痛苦。也遇见跟你一样的情况，那种圆的是DDM 聚集。不是蛋白晶体。这个我可以百分之百确定，我长了很多都是这样的。
如果想要缓解的话，需要用100KD的浓缩管浓缩，使DDM聚集相对能少一点。但是蛋白也会减少，这是没办法的办法。
赞一下 回复此楼
3楼2016-01-08 20:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐乐lelele

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 1074799343 at 2016-01-08 20:05:46
我也在长膜蛋白晶体，很是痛苦。也遇见跟你一样的情况，那种圆的是DDM 聚集。不是蛋白晶体。这个我可以百分之百确定，我长了很多都是这样的。
如果想要缓解的话，需要用100KD的浓缩管浓缩，使DDM聚集相对能少一点。 ...

你好，我是蛋白纯化的新手小白，想问一下膜蛋白跑SDS-PAGE胶前，为什么不能加热上样？
赞一下 回复此楼
4楼2018-08-06 20:26:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境工程 085701，267求调剂 +14 minht 2026-03-29 14/700 2026-04-01 01:42 by 1018329917
[考研] 311求调剂 +8 李芷新1 2026-03-31 8/400 2026-04-01 01:39 by 1018329917
[考研] 一志愿085600中科院宁波所276分求调剂 +16 材料学257求调剂 2026-03-28 17/850 2026-04-01 01:32 by 1018329917
[考研] 352分-085602-一志愿985 +6 海纳百川Ly 2026-03-29 6/300 2026-03-31 21:06 by yuq
[考研] 085602 307分 求调剂 +10 不知道叫什么！ 2026-03-26 10/500 2026-03-31 19:53 by Dyhoer
[考研] 复试调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-03-31 7/350 2026-03-31 19:49 by Dyhoer
[考研] 材料调剂 +9 Eujd1 2026-03-31 10/500 2026-03-31 18:41 by JourneyLucky
[考研] 290分调剂求助 +10 吉祥止止陈 2026-03-25 10/500 2026-03-31 17:54 by 544594351
[考研] 理学07化学 303求调剂 +8 睿08 2026-03-27 8/400 2026-03-31 16:31 by 690616278
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:56 by jp9609
[考研] 一志愿西电085401数一英一299求调剂 六级521 +4 爱吃大鸭梨 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:51 by 搏击518
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +6 恬淡ye 2026-03-31 7/350 2026-03-31 11:28 by 恬淡ye
[考研] 083000学硕274求调剂 +12 Li李鱼 2026-03-26 12/600 2026-03-31 10:01 by cal0306
[考研] 279求调剂 +12 j的立方 2026-03-29 12/600 2026-03-30 20:30 by dick_runner
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +4 邱gl 2026-03-26 7/350 2026-03-30 08:39 by 探123
[考研] 332求92调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 071000生物学求调剂，初试成绩343 +7 小小甜面团 2026-03-25 7/350 2026-03-28 20:25 by 唐沐儿
[考研] 352分 化工与材料 +5 海纳百川Ly 2026-03-27 5/250 2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭