| 查看: 3171 | 回复: 4 | |||
lixin123qq木虫 (小有名气)
小小博士
|
[求助]
关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！ 已有3人参与
|
|
各位学长前辈你们好，我是天津工生所的学生，现在在做一个膜蛋白的表达纯化以及结构解析。由于经验不足，遇到各种问题，想请教下各位前辈~~ 我们是采用大肠杆菌C43来对目的膜蛋白进行外源表达，我选择的是DDM来溶解细胞膜并提取膜蛋白（溶膜效果不错）。但是： 1. 在进行SDS-PAGE时，条带总是弥散状态（样品加入loading buffer后直接上样电泳，没有加热），用同样的loading buffer跑可溶蛋白，则没有弥散现象。这是什么原因呢？如何解决？弥散状态是否能说明蛋白以不均一状态存在？ 2. 我们在得到纯度较好的蛋白后进行hampton screen 试剂盒筛选点晶，发现有很多条件下长出不很规则的圆球状颗粒，用捞晶环碰触，其质感不像晶体，有种“绵绵”的感觉，请问大家有遇到同样情况吗？这种颗粒是什么呢？是detergent？什么原因导致这种颗粒的形成呢？ 3. 我手上还有另外一个膜蛋白，也是用DDM进行溶膜提取，Ni柱纯化后，4度放置一天则会发现其溶液呈烟雾状，这应该是蛋白不稳定导致的，遇到这种情况我该从哪些方面进行改善呢？ 课题纠缠于这些问题不得进展，很是痛苦，希望各位前辈不吝赐教，不胜感激！  膜蛋白SDS-PAGE.jpg  球状颗粒.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有289人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- his标签纯化的蛋白如何保存
已经有4人回复
- 请教一下过镍柱的时候如果一次要过多种不同的目的蛋白，中间需要怎样处理
已经有4人回复
- 求助酶的镍柱纯化
已经有8人回复
- 镍柱纯化His标签蛋白，洗脱不下来
已经有11人回复
- 切胶纯化蛋白，加loadingbuffer跑sds-page没有条带。
已经有12人回复
- western blot中古怪的非特异性条带
已经有9人回复
- 求镍柱子纯化表达蛋白的具体步骤，注意事项！！！
已经有5人回复
- 求助 膜蛋白纯化 IP
已经有3人回复
- 300金币求帮忙解决个PMF相关的问题
已经有10人回复
- 请高手解答细胞瞬转蛋白提取及纯化
已经有3人回复
- western blot 条带
已经有15人回复
- 纯化出的蛋白没有活性，求教！
已经有14人回复
- 为啥western有这么多条带
已经有18人回复
- 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化
已经有10人回复
- 蛋白包涵体透析后杂蛋白很多，请教原因
已经有10人回复
- 求助！切胶回收蛋白的方法
已经有9人回复
- 【求助/交流】纯化酶切后的膜蛋白做Western blot没条带，why？
已经有9人回复
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-25 20:27:58
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-25 20:27:58
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2014-06-25 19:27:20
1074799343
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 109.1
- 散金: 10
- 帖子: 26
- 在线: 59.8小时
- 虫号: 1785174
- 注册: 2012-04-28
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2016-01-08 20:05:46
4楼2018-08-06 20:26:44
5楼2018-08-06 21:00:47
