应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！
51/1返回列表
查看: 3146  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lixin123qq

木虫 (小有名气)

小小博士

[求助] 关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！ 已有3人参与

各位学长前辈你们好，我是天津工生所的学生，现在在做一个膜蛋白的表达纯化以及结构解析。由于经验不足，遇到各种问题，想请教下各位前辈~~
我们是采用大肠杆菌C43来对目的膜蛋白进行外源表达，我选择的是DDM来溶解细胞膜并提取膜蛋白（溶膜效果不错）。但是：
1. 在进行SDS-PAGE时，条带总是弥散状态（样品加入loading buffer后直接上样电泳，没有加热），用同样的loading buffer跑可溶蛋白，则没有弥散现象。这是什么原因呢？如何解决？弥散状态是否能说明蛋白以不均一状态存在？
2. 我们在得到纯度较好的蛋白后进行hampton screen 试剂盒筛选点晶，发现有很多条件下长出不很规则的圆球状颗粒，用捞晶环碰触，其质感不像晶体，有种“绵绵”的感觉，请问大家有遇到同样情况吗？这种颗粒是什么呢？是detergent？什么原因导致这种颗粒的形成呢？
3. 我手上还有另外一个膜蛋白，也是用DDM进行溶膜提取，Ni柱纯化后，4度放置一天则会发现其溶液呈烟雾状，这应该是蛋白不稳定导致的，遇到这种情况我该从哪些方面进行改善呢？
课题纠缠于这些问题不得进展，很是痛苦，希望各位前辈不吝赐教，不胜感激！

关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！
膜蛋白SDS-PAGE.jpg


关于膜蛋白表达纯化及结构解析的几个问题,求解答！-1
球状颗粒.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-25 16:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wacx33

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-25 20:27:58
本帖内容被屏蔽
2楼2014-06-25 19:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1074799343

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也在长膜蛋白晶体，很是痛苦。也遇见跟你一样的情况，那种圆的是DDM 聚集。不是蛋白晶体。这个我可以百分之百确定，我长了很多都是这样的。
如果想要缓解的话，需要用100KD的浓缩管浓缩，使DDM聚集相对能少一点。但是蛋白也会减少，这是没办法的办法。
赞一下 回复此楼
3楼2016-01-08 20:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐乐lelele

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 1074799343 at 2016-01-08 20:05:46
我也在长膜蛋白晶体，很是痛苦。也遇见跟你一样的情况，那种圆的是DDM 聚集。不是蛋白晶体。这个我可以百分之百确定，我长了很多都是这样的。
如果想要缓解的话，需要用100KD的浓缩管浓缩，使DDM聚集相对能少一点。 ...

你好，我是蛋白纯化的新手小白，想问一下膜蛋白跑SDS-PAGE胶前，为什么不能加热上样？
赞一下 回复此楼
4楼2018-08-06 20:26:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐乐lelele

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by wacx33 at 2014-06-25 19:27:20
你那种晶体我以前也碰到过，不过我的是水溶性蛋白，我那时长的是白的那种圆状物，后来发现是盐晶。
关于蛋白会雾化，估计是不稳定，看看换换buffer能否增加稳定性，分装后直接冻存-80℃，再长晶体看看怎么样。
另 ...

你好，我是蛋白纯化的新手小白，想问一下膜蛋白跑SDS-PAGE胶前，为什么不能加热上样？
赞一下 回复此楼
5楼2018-08-06 21:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lixin123qq 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 鹤遨予卿 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:44 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:06 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 纺织、生物、化学、材料相关专业招生了 +4 耶耶业 2026-03-09 7/350 2026-03-12 19:05 by Equinoxhua
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 0857 资源与环境 285分 +6 未名考生 2026-03-09 6/300 2026-03-11 21:08 by 30660438
[考研] 0856材料与化工353分求调剂 +11 NIFFFfff 2026-03-09 11/550 2026-03-10 18:36 by suyuanhai
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭