| 查看: 1069 | 回复: 2 | ||
[求助]
Red重组PCR相关问题
|
|
前期通过设计同源臂，以用pkD3中氯霉素片段替换目标基因（电泳结果、测序结果均以证明替换成功），导入pcp20质粒，通过调整温度，以实现氯霉素基因的脱除。平板验证时菌落在氯霉素板上是无法生长的，初步表明cm基因片段应该已经脱除了。但以原来的验证引物（验证氯霉素取代了目的基因所设计的引物，在目标基因上下游100 bp左右）进行PCR验证，换过很多种酶（Takara的ex-Taq，primer star，诺唯赞的mix）并且试过温度梯度，就是怎么也扩不出来片段。 氯霉素替换目标基因后片段大小在1200bp左右，这个和实验现象是符合的，后面氯霉素脱除之后，片段大小可能小于500。想请教下各位大侠，之前是否遇到过这种情况，是怎么解决的呢，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
献血感触
已经有6人回复
-
2026山东省优青
已经有4人回复
-
评审有感
已经有16人回复
-
反应很差，大量原料没有反应
已经有3人回复
-
Sci. Bull. 悲剧经验
已经有4人回复
-
找博士生导师
已经有7人回复
-
上海大学实验技术岗位非升即走
已经有11人回复
-
26/27申博自荐-锂/钠电池方向
已经有4人回复
-
同样的基金本子，换个专家直接从C变A！
已经有3人回复
-
别被青基扩招骗了！26年科研内卷才刚刚开始
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌液pcr鉴定毕赤酵母重组结果
已经有3人回复
- 同源重组阳性单菌落问题
已经有8人回复
- 电泳的时候，总DNA跑出条带，PCR扩增后没有条带，都有什么原因啊
已经有8人回复
- RED重组敲除基因，PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带
已经有18人回复
- 酵母基因敲除，同源臂长度的问题
已经有9人回复
- Red重组老是不成功，求救
已经有49人回复
- 大肠杆菌PCR鉴定
已经有3人回复
- 如何浓缩PCR产物？
已经有7人回复
- 关于重组能的计算问题
已经有5人回复
- 大肠杆菌Red重组法基因敲除求助
已经有6人回复
- PCR回收产物做PCR模板，为什么扩不出来
已经有8人回复
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- 一个关于感受态转化效率的问题
已经有11人回复
- 重组PCR验证时没有目的条带
已经有3人回复
- 【求助/交流】求助：重组菌落PCR时遇到的问题，很纠结，非常纠结，极度纠结，在线等
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于pfu酶PCR
已经有8人回复
- 【求助/交流】求助一个很奇怪的PCR现象
已经有23人回复
- 【求助/交流】请教关于大肠杆菌lamda RED重组问题
已经有23人回复
- 【求助/交流】Red同源重组技术整合位点的选择
已经有9人回复
- 细菌同源重组进行基因敲除的同源臂最小需要多少
已经有10人回复
wolfghost
版主 (知名作家)
- 博学EPI: 432
- 应助: 101 (高中生)
- 贵宾: 7.987
- 金币: 36632.2
- 散金: 11283
- 红花: 198
- 沙发: 8
- 帖子: 7794
- 在线: 1298.1小时
- 虫号: 573180
- 注册: 2008-06-13
- 性别: GG
- 专业: 电化学
- 管辖: 有奖问答
2楼2014-08-16 13:50:29
CM799183890
禁虫 (初入文坛)
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2016-01-08 15:15:44
30