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sai00fuji

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】求助:重组菌落PCR时遇到的问题,很纠结,非常纠结,极度纠结,在线等

重组菌落PCR的问题:用通用引物T7和SP6时,没有条带。用自己设计的引物(就是做RT-PCR时的引物)有条带。而且条带长度就是目的基因的长度。这是怎么回事呢?

若说没连上那自己设计的引物怎么能P出条带呢。若说连上了,怎么用T7、SP6就P不出条带呢?

难道是引物问题?

[ Last edited by sai00fuji on 2010-11-9 at 16:06 ]
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gao-feng

铁杆木虫 (著名写手)


sai00fuji(金币+1):有T7 SP6序列 2010-11-10 08:59:31
你质粒上有T7、SP6的序列没有
2楼2010-11-09 19:36:50
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topstone

金虫 (正式写手)


sai00fuji(金币+1):没有做,当时是用自己设计的引物P的,没有用空载做阴性对照 2010-11-10 09:00:39
PCR时做阴性对照了吗?小心别是PCR产物污染造成的假阳性结果!
3楼2010-11-09 20:06:07
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sai00fuji(金币+1):怎么看引物是否降解?引物是上个月刚买的 2010-11-10 12:49:24
(1)检查重组质粒中是否还有T7和SP6的序列
(2)检测两条通用引物是否降解
(3)附带隐形对照重新PCR
4楼2010-11-10 10:22:20
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sai00fuji(金币+1):也是啊,试试去 2010-11-11 11:22:03
可以通过跑琼脂糖凝胶来检测引物是否降解
5楼2010-11-10 14:44:28
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sai00fuji

金虫 (正式写手)


用空载做阴性对照,T7  SP6引物,还是没有条带
6楼2010-11-11 11:28:57
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