应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：重组菌落PCR时遇到的问题，很纠结，非常纠结，极度纠结，在线等
61/1返回列表
查看: 761  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sai00fuji

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助：重组菌落PCR时遇到的问题，很纠结，非常纠结，极度纠结，在线等

重组菌落PCR的问题：用通用引物T7和SP6时，没有条带。用自己设计的引物（就是做RT-PCR时的引物）有条带。而且条带长度就是目的基因的长度。这是怎么回事呢？

若说没连上那自己设计的引物怎么能P出条带呢。若说连上了，怎么用T7、SP6就P不出条带呢？

难道是引物问题？

[ Last edited by sai00fuji on 2010-11-9 at 16:06 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-09 15:42:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gao-feng

铁杆木虫 (著名写手)
sai00fuji(金币+1):有T7 SP6序列 2010-11-10 08:59:31
你质粒上有T7、SP6的序列没有
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-09 19:36:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

topstone

金虫 (正式写手)
sai00fuji(金币+1):没有做，当时是用自己设计的引物P的，没有用空载做阴性对照 2010-11-10 09:00:39
PCR时做阴性对照了吗?小心别是PCR产物污染造成的假阳性结果!
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-09 20:06:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
sai00fuji(金币+1):怎么看引物是否降解？引物是上个月刚买的 2010-11-10 12:49:24
(1)检查重组质粒中是否还有T7和SP6的序列
（2）检测两条通用引物是否降解
（3）附带隐形对照重新PCR
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-10 10:22:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
sai00fuji(金币+1):也是啊，试试去 2010-11-11 11:22:03
可以通过跑琼脂糖凝胶来检测引物是否降解
赞一下 回复此楼
5楼2010-11-10 14:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sai00fuji

金虫 (正式写手)
用空载做阴性对照，T7  SP6引物，还是没有条带
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-11 11:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sai00fuji 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭