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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：重组菌落PCR时遇到的问题，很纠结，非常纠结，极度纠结，在线等
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sai00fuji

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助：重组菌落PCR时遇到的问题，很纠结，非常纠结，极度纠结，在线等

重组菌落PCR的问题：用通用引物T7和SP6时，没有条带。用自己设计的引物（就是做RT-PCR时的引物）有条带。而且条带长度就是目的基因的长度。这是怎么回事呢？

若说没连上那自己设计的引物怎么能P出条带呢。若说连上了，怎么用T7、SP6就P不出条带呢？

难道是引物问题？

[ Last edited by sai00fuji on 2010-11-9 at 16:06 ]
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1楼 2010-11-09 15:42:57
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gao-feng

铁杆木虫 (著名写手)
sai00fuji(金币+1):有T7 SP6序列 2010-11-10 08:59:31
你质粒上有T7、SP6的序列没有
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2楼2010-11-09 19:36:50
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topstone

金虫 (正式写手)
sai00fuji(金币+1):没有做，当时是用自己设计的引物P的，没有用空载做阴性对照 2010-11-10 09:00:39
PCR时做阴性对照了吗?小心别是PCR产物污染造成的假阳性结果!
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3楼2010-11-09 20:06:07
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
sai00fuji(金币+1):怎么看引物是否降解？引物是上个月刚买的 2010-11-10 12:49:24
(1)检查重组质粒中是否还有T7和SP6的序列
（2）检测两条通用引物是否降解
（3）附带隐形对照重新PCR
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4楼2010-11-10 10:22:20
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
sai00fuji(金币+1):也是啊，试试去 2010-11-11 11:22:03
可以通过跑琼脂糖凝胶来检测引物是否降解
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5楼2010-11-10 14:44:28
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sai00fuji

金虫 (正式写手)
用空载做阴性对照，T7  SP6引物，还是没有条带
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6楼2010-11-11 11:28:57
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