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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 植物总RNA粗提之后能直接用DNA酶去除杂质吗？
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mouse_耗子

铁虫 (初入文坛)

[求助] 植物总RNA粗提之后能直接用DNA酶去除杂质吗？ 已有3人参与

我们实验室常用的方法是异硫氰酸胍的方法，使用RNA变性裂解液以后，直接两次氯仿抽提，之后加NaAc, 异丙醇沉淀,
乙醇洗涤后吹干，再溶，再用DNA消化去DNA，然后再用酚仿，氯仿抽提，最后沉淀出干净的RNA。感觉比较繁琐，而且时间很长！
请教各位大神，能不能将这之间的粗提之后的沉淀溶解步骤去掉，直接用DNA酶消化之后往后提取？
不知道前面的裂解液对酶的活性有没有影响？裂解液里面有 柠檬酸钠，十二烷基硫酸钠， 异硫氰酸胍，PVP 和β-巯基乙醇等物质，在氯仿抽提的过程中，这些物质是不是还存在于水相当中？
谢各路大神~！
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时间总是能够挤出来的~！
1楼 2014-06-12 11:06:30
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
我去，老帖子被翻出来的啊
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核酸提取与Taqman诊断
6楼2020-10-14 08:27:11
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-12 12:59:25
那你要冒很大的风险哦，抽干净了再除比较好

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-06-12 11:09:11
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mouse_耗子

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-12 11:09:11
那你要冒很大的风险哦，抽干净了再除比较好

就是说粗体的液相还是对酶解有影响的？
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时间总是能够挤出来的~！
3楼2014-06-12 11:56:50
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

当然可以，很多商品化试剂都是这么做的，柱上消化和磁珠上消化比比皆是。沉淀消化的话，要用DNase和DNase Buffer重悬，消化完加乙醇和盐沉淀
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核酸提取与Taqman诊断
5楼2020-10-14 08:25:49
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