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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 基因在不同载体表达情况不同
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

[求助] 基因在不同载体表达情况不同 已有1人参与

请问我的基因有的在pET-32a中表达，有的在PGEX-4T-1中表达，这是为什么呢？与什么有关啊？能说的详细点吗？求知道！！！！
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1楼 2014-05-25 22:52:37
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小虫子MM(西门吹雪170代发): 金币+10, 鼓励热心回帖交流 2014-05-26 12:38:48
通常情况下，没有哪一项规定说某个蛋白只能用什么样的载体来表达，选择什么样的载体一般考虑以下几个方面的内容。
1.首先是这个载体是否可以用。不少载体是通过酶切连接来构建的，某些基因因为酶切位点不合适，可能上不了载体，这样这个载体就不能用了。商业化的载体一般都会有足够的酶切位点，大部分基因都可以上。还有就是载体上的启动子之类的原件，某些启动子是在真核生物才有用的，有些则适用于原核生物，要根据实验的目的来确定载体是否能用。
2.其次是考虑实验室的习惯。比如我以前的实验室就比较喜欢pET系列的载体，师兄师姐积累的经验比较成熟，用起来出什么问题了很容易解决，相关的试剂如内切酶等储备也很足。要是引入一个新的载体，实验室要安排专门的人来验证，很麻烦的。如你提问的问题，我在设计引物的时候，如果同时有pET-32a和PGEX-4T-1两个载体，我一般会找两个相同的酶切位点，设计能同时上两个载体的引物，最后写文章的时候我只写一个，是因为另外一个效果没有这么好。
3.如果找实验室的习惯做不出来的话，就再考虑根据文献更改载体。
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2楼2014-05-26 11:20:19
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2014-05-26 11:20:19
通常情况下，没有哪一项规定说某个蛋白只能用什么样的载体来表达，选择什么样的载体一般考虑以下几个方面的内容。
1.首先是这个载体是否可以用。不少载体是通过酶切连接来构建的，某些基因因为酶切位点不合适，可能 ...

请问，我是设计的一样酶切位点，32a和4T都做了，但在32a中表达，4T不表达，什么原因呢？
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3楼2014-05-26 13:50:57
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小虫子MM at 2014-05-26 13:50:57
请问，我是设计的一样酶切位点，32a和4T都做了，但在32a中表达，4T不表达，什么原因呢？...

这个我也解释不清楚，平时我也经常碰到这种情况。要是一个载体做出来，那就换一个。
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4楼2014-05-26 18:32:24
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2014-05-26 11:20:19
通常情况下，没有哪一项规定说某个蛋白只能用什么样的载体来表达，选择什么样的载体一般考虑以下几个方面的内容。
1.首先是这个载体是否可以用。不少载体是通过酶切连接来构建的，某些基因因为酶切位点不合适，可能 ...

如果多个基因串联转入pet-32a，加酶切位点的引物怎么设计
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
5楼2015-08-19 15:50:22
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