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lhjun1987铁杆木虫 (正式写手)
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| 最近在做western，新手一个，请教大神帮忙！有关大分子蛋白比如200KD以上，在western过程中，和普通分子量蛋白相比，有哪些不同的地方，比如transfer buffer中加入SDS的量，以及其他的细节，越详细越好，答得好可追加金币！！！ |
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 Western Blot技术 |
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sunrq516516
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4楼2014-05-27 09:18:19
sunrq516516
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
lhjun1987: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2014-05-27 11:38:32
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lhjun1987: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2014-05-27 11:38:32
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个人经验： 就是比较难转而以，用湿转比较好，相对提高一点电压（我们是用恒定电压跑，我看论坛上有人是用恒定电流），因为电压高的话会使得转膜液发热更厉害，所以放在冰上跑最好。 如果同张膜上有小分子量的蛋白转，要考虑小分子量蛋白不会被转过度（穿膜）。不过用PVDF就不会有这种问题了~ buffer的话，没有在transfer buffer里加过SDS，不过新鲜配置的buffer里，20%的甲醇据说可以帮助膜。 我跑过分子量是250-280的蛋白，90V，2hours，做出来是没有问题的。如果你用丽春红染膜，不一定能看见条带，这个不用担心。 |
2楼2014-05-21 13:07:56
lhjun1987
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