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western样品处理问题 已有4人参与
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western样品处理，各位大虾们有木有什么好办法哦？ 跪求各方意见哦，呵呵、、、、 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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zhaoyonggang
银虫 (小有名气)
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- 散金: 5
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- 在线: 61.7小时
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- 专业: 细胞信号转导
2楼2011-11-19 11:31:47
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！很活跃哦，继续加油哈~ 2011-11-23 20:26:22
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！很活跃哦，继续加油哈~ 2011-11-23 20:26:22
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细胞样品还是组织样品？我的方法很普遍，但是要求操作条件比较严格~ 这样，收集细胞（或者把组织剪成碎片），离心后弃掉上清培养基，然后加入组织/细胞裂解液，一般都用RIPA或者cell lysis，但是一定记住要加足够量的蛋白酶抑制剂！！！有用PMSF的，但是我觉得Roche公司的“Protease Inhibitor Cocktail Tables”更好用~ 在冰上静置20-30min等细胞、组织裂解稍完全些，上超声振荡或者组织研磨仪，把细胞、组织打成粉碎均一的匀浆液；再高转速离心（14000rpm），3-5min，你会发现没有裂开的组织纤维或者细胞碎片都粘在管底了，上清就都是你的蛋白！ LZ注意啊，操作整个过程尽量都要在冰上进行！！！ |
3楼2011-11-23 15:48:38
4楼2011-11-24 16:56:00
5楼2011-11-25 20:15:35
6楼2011-11-30 15:51:25
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