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noah1020

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good!很活跃哦,继续加油哈~ 2011-11-23 20:26:22
细胞样品还是组织样品?我的方法很普遍,但是要求操作条件比较严格~
这样,收集细胞(或者把组织剪成碎片),离心后弃掉上清培养基,然后加入组织/细胞裂解液,一般都用RIPA或者cell lysis,但是一定记住要加足够量的蛋白酶抑制剂!!!有用PMSF的,但是我觉得Roche公司的“Protease Inhibitor Cocktail Tables”更好用~ 在冰上静置20-30min等细胞、组织裂解稍完全些,上超声振荡或者组织研磨仪,把细胞、组织打成粉碎均一的匀浆液;再高转速离心(14000rpm),3-5min,你会发现没有裂开的组织纤维或者细胞碎片都粘在管底了,上清就都是你的蛋白!
LZ注意啊,操作整个过程尽量都要在冰上进行!!!
3楼2011-11-23 15:48:38
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