| 查看: 897 | 回复: 4 | |||
lhjun1987铁杆木虫 (正式写手)
|
[求助]
求教western 已有1人参与
|
| 最近在做western，新手一个，请教大神帮忙！有关大分子蛋白比如200KD以上，在western过程中，和普通分子量蛋白相比，有哪些不同的地方，比如transfer buffer中加入SDS的量，以及其他的细节，越详细越好，答得好可追加金币！！！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 Western Blot技术 |
» 猜你喜欢
材料工程281还有调剂机会吗
已经有20人回复
-
调剂
已经有8人回复
-
求调剂，一志愿材料科学与工程985，365分，
已经有10人回复
-
310求调剂
已经有13人回复
-
293求调剂
已经有5人回复
-
山东省基金2026
已经有6人回复
-
335求调剂
已经有8人回复
-
290求调剂
已经有9人回复
-
307求调剂
已经有10人回复
-
313求调剂
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问，WB转膜后用考染的原因或者目的是什么？
已经有9人回复
- western bloting转印求教
已经有16人回复
- western blot伯乐电泳仪的问题请教！谢谢大家！
已经有3人回复
- 真情求助：买的用于Western blot 的一抗能不能用来做免疫荧光或者免疫组化
已经有6人回复
- 求助 western blot 分离胶处残留条带
已经有8人回复
- Western blot 有没有大仙做过Cleaved caspase-3(17kD),求操作经验啊！
已经有11人回复
- 求助，Western-Blot转膜不成功
已经有22人回复
- western样品处理问题
已经有5人回复
- 请教western blot 时蛋白稀释液情况
已经有4人回复
- western blot 求助，请高手指点一下
已经有8人回复
- 【求助/交流】westernblot
已经有10人回复
- 【求助/交流】western blot 缺带 断带
已经有21人回复
- 【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办
已经有19人回复
- 【求助/交流】Westen blot问题请教
已经有8人回复
- 【求助/交流】求助灰度分析
已经有3人回复
- 【求助/交流】western 曝光问题
已经有20人回复
- 【求助】关于神经元的western所遇到的问题
已经有20人回复
- 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！
已经有10人回复
- 【求助/交流】western杂交
已经有16人回复
- 【求助】western结果条带位置不对，是何原因？
已经有7人回复
- 【求助/交流】western blot中，蛋白经SDSPAGE后不是变性了吗，怎么还能和一抗结合？
已经有13人回复
- 【求助/交流】western blot抗体稀释液中叠氮钠的含量
已经有5人回复
- 请教用PVDF膜做western的朋友
已经有12人回复
sunrq516516
金虫 (小有名气)
- 应助: 23 (小学生)
- 金币: 1066.8
- 散金: 20
- 红花: 4
- 帖子: 155
- 在线: 45.1小时
- 虫号: 2731470
- 注册: 2013-10-17
- 性别: MM
- 专业: 代谢性疾病药物药理
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lhjun1987: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2014-05-27 11:38:32
感谢参与，应助指数 +1
lhjun1987: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2014-05-27 11:38:32
|
个人经验： 就是比较难转而以，用湿转比较好，相对提高一点电压（我们是用恒定电压跑，我看论坛上有人是用恒定电流），因为电压高的话会使得转膜液发热更厉害，所以放在冰上跑最好。 如果同张膜上有小分子量的蛋白转，要考虑小分子量蛋白不会被转过度（穿膜）。不过用PVDF就不会有这种问题了~ buffer的话，没有在transfer buffer里加过SDS，不过新鲜配置的buffer里，20%的甲醇据说可以帮助膜。 我跑过分子量是250-280的蛋白，90V，2hours，做出来是没有问题的。如果你用丽春红染膜，不一定能看见条带，这个不用担心。 |
2楼2014-05-21 13:07:56
lhjun1987
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 8791.5
- 散金: 30
- 帖子: 507
- 在线: 731小时
- 虫号: 2058279
- 注册: 2012-10-13
- 性别: GG
- 专业: 药物毒理
3楼2014-05-27 08:12:04
sunrq516516
金虫 (小有名气)
- 应助: 23 (小学生)
- 金币: 1066.8
- 散金: 20
- 红花: 4
- 帖子: 155
- 在线: 45.1小时
- 虫号: 2731470
- 注册: 2013-10-17
- 性别: MM
- 专业: 代谢性疾病药物药理
4楼2014-05-27 09:18:19
5楼2016-12-02 17:20:29
