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宁宁0320

新虫 (初入文坛)

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[求助] 荧光定量PCR 模板问题已有2人参与

想做某种昆虫不同发育阶段体内某种菌的大概趋势，想做相对定量PCR，看有人用DNA做定量的，不是很明白，直接用DNA做定量和反转录做定量的区别？？分别适合什么情况？

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1楼2014-05-21 09:29:46

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宁宁0320

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 燕归来0101 at 2014-05-22 21:18:10
如果是看这种菌的含量变化，我觉得做绝对定量吧，构建标曲，然后在不同生长阶段取样品。我现在要做植物的含菌量变化，应该差不多，不过平行可能要多设置一些。

亲太感谢你回复我的帖子了，好几天都没人理我呀，我的这个虫子有5个若虫龄期，我想做5个若虫龄期和卵期，成虫阶段，菌量变化，我是刚刚接触定量，本想简单一点做个相对定量，但是好些东西还不太明白，
1. 若是我做绝对定量，我这7个样本需要做几个标曲呢？虫子卵和一龄阶段虫龄很小，不好收集，提RNA很难呢，我看有人做其他虫的是仅仅做一个刚刚羽化的成虫的标曲。
2.做标曲有做DNA 标曲的吗？
3.相对定量其实模板浓度要一致吗？像我这种情况直接用DNA做相对定量，模板浓度很难控制.