24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1153  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

宁宁0320

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR 模板问题 已有2人参与

想做某种昆虫不同发育阶段体内某种菌的大概趋势,想做相对定量PCR,看有人用DNA做定量的,不是很明白,直接用DNA做定量和反转录做定量的区别??分别适合什么情况?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

共生菌寻求实验盟友,互帮互助,实验进步
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宁宁0320

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 燕归来0101 at 2014-05-22 21:18:10
如果是看这种菌的含量变化,我觉得做绝对定量吧,构建标曲,然后在不同生长阶段取样品。我现在要做植物的含菌量变化,应该差不多,不过平行可能要多设置一些。

亲太感谢你回复我的帖子了,好几天都没人理我呀,我的这个虫子有5个若虫龄期,我想做5个若虫龄期和卵期,成虫阶段,菌量变化,我是刚刚接触定量,本想简单一点做个相对定量,但是好些东西还不太明白,
    1. 若是我做绝对定量,我这7个样本需要做几个标曲呢?虫子卵和一龄阶段虫龄很小,不好收集,提RNA很难呢,我看有人做其他虫的是仅仅做一个刚刚羽化的成虫的标曲。
    2.做标曲有做DNA 标曲的吗?
    3.相对定量其实模板浓度要一致吗?像我这种情况直接用DNA做相对定量,模板浓度很难控制.
共生菌寻求实验盟友,互帮互助,实验进步
4楼2014-05-23 09:08:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

燕归来0101

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果是看这种菌的含量变化,我觉得做绝对定量吧,构建标曲,然后在不同生长阶段取样品。我现在要做植物的含菌量变化,应该差不多,不过平行可能要多设置一些。
2楼2014-05-22 21:18:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

燕归来0101

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

还有,相对定量应该是看某种基因的表达量是上调还是下调了,所以需要先提取RNA,再反转录。你这个看菌量变化应该不用做RNA的。
3楼2014-05-22 21:20:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangzwty

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1. 7格样本只需要做一个标曲,做标曲的目的是确定一下你模板的稀释倍数。
2. 一般都是用cDNA做标曲的。
3.相对定量的模板浓度时一致的。
祝你成功!
5楼2014-06-16 15:47:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +7 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 7/350 2026-03-27 02:29 by fmesaito
[考研] 316求调剂 +4 江辞666 2026-03-26 4/200 2026-03-27 00:33 by wxiongid
[考研] 286求调剂 +3 lim0922 2026-03-26 3/150 2026-03-26 23:07 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +5 材料cailiao 2026-03-21 5/250 2026-03-26 20:41 by fmesaito
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 279求调剂 +6 红衣隐官 2026-03-21 6/300 2026-03-26 18:32 by 不吃魚的貓
[考研] 274求调剂 +14 顾九笙要谦虚 2026-03-24 20/1000 2026-03-26 18:15 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-26 4/200 2026-03-26 16:00 by 不吃魚的貓
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 296求调剂 +4 汪!?! 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪!?!
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 求调剂 +5 林之夕 2026-03-24 5/250 2026-03-24 17:16 by dick_runner
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
信息提示
请填处理意见