应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR 模板问题
51/1返回列表
查看: 1378  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

宁宁0320

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR 模板问题 已有2人参与

想做某种昆虫不同发育阶段体内某种菌的大概趋势，想做相对定量PCR，看有人用DNA做定量的，不是很明白，直接用DNA做定量和反转录做定量的区别？？分别适合什么情况？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
共生菌寻求实验盟友，互帮互助，实验进步
1楼 2014-05-21 09:29:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

燕归来0101

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是看这种菌的含量变化，我觉得做绝对定量吧，构建标曲，然后在不同生长阶段取样品。我现在要做植物的含菌量变化，应该差不多，不过平行可能要多设置一些。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-05-22 21:18:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

燕归来0101

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

还有，相对定量应该是看某种基因的表达量是上调还是下调了，所以需要先提取RNA，再反转录。你这个看菌量变化应该不用做RNA的。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-05-22 21:20:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宁宁0320

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 燕归来0101 at 2014-05-22 21:18:10
如果是看这种菌的含量变化，我觉得做绝对定量吧，构建标曲，然后在不同生长阶段取样品。我现在要做植物的含菌量变化，应该差不多，不过平行可能要多设置一些。

亲太感谢你回复我的帖子了，好几天都没人理我呀，我的这个虫子有5个若虫龄期，我想做5个若虫龄期和卵期，成虫阶段，菌量变化，我是刚刚接触定量，本想简单一点做个相对定量，但是好些东西还不太明白，
    1. 若是我做绝对定量，我这7个样本需要做几个标曲呢？虫子卵和一龄阶段虫龄很小，不好收集，提RNA很难呢，我看有人做其他虫的是仅仅做一个刚刚羽化的成虫的标曲。
    2.做标曲有做DNA 标曲的吗？
    3.相对定量其实模板浓度要一致吗？像我这种情况直接用DNA做相对定量，模板浓度很难控制.
赞一下 回复此楼
共生菌寻求实验盟友，互帮互助，实验进步
4楼2014-05-23 09:08:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangzwty

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1. 7格样本只需要做一个标曲，做标曲的目的是确定一下你模板的稀释倍数。
2. 一般都是用cDNA做标曲的。
3.相对定量的模板浓度时一致的。
祝你成功！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-06-16 15:47:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 宁宁0320 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 15:18 by KM5EcsNQRBPn
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 14:57 by KM5EcsNQRBPn
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 6/300 2026-08-23 14:45 by KM5EcsNQRBPn
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 07:41 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 11/550 2026-08-23 02:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭