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friedy

金虫 (初入文坛)

[求助] 菌液pcr鉴定毕赤酵母重组结果已有1人参与

对毕赤酵母菌重组后保存的甘油菌进行活化，直接菌液pcr鉴定重组的是否完整。因为已经保存了好久，而且养了几次平板上始终没有乳白色菌落长出。重组后的目的目的片段在1000左右，空载体在600左右，对14株活化菌pcr结果，有3个没有的，最后一个在600左右的位置，其余位置正确，请问，我是可以用这些正确位置的菌进行后续的诱导和其他实验么

菌液pcr鉴定毕赤酵母重组结果
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1楼2014-05-19 22:09:27
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by friedy at 2014-05-20 08:11:55
养了几回是淡黄色的扁平片状。
1.请问退化严重了是怎么从图上看出来的呢？退化了有什么解决办法么，我下一步实验就是想要高密度发酵诱导表达蛋白的。
2.重新保存是把现在活化起来的菌加甘油就可以了么？复壮要怎 ...

1.正常新鲜的毕赤酵母在平板上划线的单菌落都是纯白或者乳白色的水滴状单菌落。你的菌的扁平片状应该是培养时间有点长后菌体菌落继续生长扩大后的形态或者不是单菌落而是一个培养系长出来的状态。你的菌是不是长的很慢，你的这个淡黄色我觉得就是酵母退化后的状态。你照一张图发上来看看吧
2.你从甘油管里接的菌做菌落PCR发现有空载或者是阴性。这说明你用的甘油管的菌并不一定是纯的，你最好把你验证正确的菌在加有相应抗生素的YPD上划个线，挑取长的比较大的单菌落，转接到YPD液培过夜培养，之后就可以制备一批甘油管了。
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大家相互帮助哈
4楼2014-05-20 19:55:34
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-20 08:25:11
你的菌体不是乳白色的话具体是什么颜色？菌落形态怎么样？先做个镜检看看是不是酵母再说吧。 如果是酵母那退化的已经很严重了。
从电泳图上看，你的菌需要重新保存了，把验证正确的单菌落转接一下重新制一批甘油管。也可以复壮一下。
验证正确的菌可以用于下一步实验，但是因为退化了，诱导效果如何不好说。
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大家相互帮助哈
2楼2014-05-20 00:13:16
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friedy

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-05-20 00:13:16
你的菌体不是乳白色的话具体是什么颜色？菌落形态怎么样？先做个镜检看看是不是酵母再说吧。 如果是酵母那退化的已经很严重了。
从电泳图上看，你的菌需要重新保存了，把验证正确的单菌落转接一下重新制一批甘油管 ...

养了几回是淡黄色的扁平片状。
1.请问退化严重了是怎么从图上看出来的呢？退化了有什么解决办法么，我下一步实验就是想要高密度发酵诱导表达蛋白的。
2.重新保存是把现在活化起来的菌加甘油就可以了么？复壮要怎么做呢？扩大培养么？
我是新手，麻烦多指教啦~~
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3楼2014-05-20 08:11:55
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