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源泉777

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 2236932
注册: 2013-01-12
性别: GG
专业: 炎症、感染与免疫

[求助] 50多的PCR引物，咋就P不出来呢

设计了一个上游引物30个CGCGGATCCATGGAGGAGGAGGACAAGAAG，
下游引物51个CCGCTCGAGCTACTTATCGTCGTCATCCTTGTAATCCAACTCATCTTTTTC
条件变性：94,30s;退火温度梯度50-60℃，30s；延伸：72℃，1min。循环：30次
照片中前面是目的片段2Kbp，后面的两个都是1kbp左右
条件都差不多，怎么前面的都是二聚体，目的条带一点都没有，而小片段1kbp还能看清楚呢？？？？求各位大神急救啊

50多的PCR引物，咋就P不出来呢

20140508grp78 ATP SBD条件.jpg

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1楼 2014-05-12 16:47:40

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jms_guan

专家顾问 (著名写手)

MedEPI: 7
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帖子: 1101
在线: 121.3小时
虫号: 845276
注册: 2009-09-11
性别: GG
专业: 人类营养
管辖: 生物医药区

应该是因为的问题，你在重新选择个位置重新设计引物吧，再有你的目的序列是不是有点长呢，这个也会导致出现问题

正在学习搞科研

2楼2014-05-17 20:53:50

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