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源泉777

新虫 (初入文坛)

[求助] 50多的PCR引物,咋就P不出来呢

设计了一个上游引物30个CGCGGATCCATGGAGGAGGAGGACAAGAAG,
                 下游引物51个CCGCTCGAGCTACTTATCGTCGTCATCCTTGTAATCCAACTCATCTTTTTC
条件变性:94,30s;退火温度梯度50-60℃,30s;延伸:72℃,1min。循环:30次
照片中前面是目的片段2Kbp,后面的两个都是1kbp左右
条件都差不多,怎么前面的都是二聚体,目的条带一点都没有,而小片段1kbp还能看清楚呢 ????求各位大神急救啊

50多的PCR引物,咋就P不出来呢
20140508grp78 ATP SBD条件.jpg
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jms_guan

专家顾问 (著名写手)

应该是因为的问题,你在重新选择个位置重新设计引物吧,再有你的目的序列是不是有点长呢,这个也会导致出现问题
正在学习搞科研
2楼2014-05-17 20:53:50
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