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ruchang2013铁虫 (初入文坛)
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这是重组后的验证 已有1人参与
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这是pTKIP-cat与一段2.3kb的核酸片段做的重组工作，图为PCR验证及酶切验证。 IP1/glk2、galP1/IP2这2对引物，若重组成功，应该有1.5kb左右的条带，显然这样大小的条带不存在，说明重组失败，那为什么会存在大条带？ “对”为pTKIP-cat,若重组成功，重组质粒是7kb  2014.0427 17菌PCR酶切.png |
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luwei13566
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3楼2014-05-13 17:43:45
luwei13566
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【答案】应助回帖
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ruchang2013(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-12 17:58:15
ruchang2013: 金币+3, 谢谢，是不是酶切时间也过短啊！我这次将质粒重新酶切观察到2条带，一条在3kb~5kb,另一条带在2kb~3kb，质粒本身是4kb。我一般酶切3~4h。或者体系不对？我是20μL加0.5μL的酶。 2014-05-13 16:48:57
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ruchang2013: 金币+3, 谢谢，是不是酶切时间也过短啊！我这次将质粒重新酶切观察到2条带，一条在3kb~5kb,另一条带在2kb~3kb，质粒本身是4kb。我一般酶切3~4h。或者体系不对？我是20μL加0.5μL的酶。 2014-05-13 16:48:57
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引物与重组质粒其他位置发生的非特异结合，有大条带很正常~ 你的marker最大量程是5K而你的重组质粒是7K？marker不太合适，换一个更大一些的吧。不过从图上看连的不是你的基因，酶切偏小，PCR也没有，重组失败。~ |
2楼2014-05-12 15:13:20
906394648
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4楼2014-05-13 19:52:51
luwei13566
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-06-01 16:58:29
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| 我一般都是20ul加1ul酶 37度4个小时。 |
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ruchang20135楼2014-05-13 20:52:37
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