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ruchang2013

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 这是重组后的验证已有1人参与

这是pTKIP-cat与一段2.3kb的核酸片段做的重组工作，图为PCR验证及酶切验证。
IP1/glk2、galP1/IP2这2对引物，若重组成功，应该有1.5kb左右的条带，显然这样大小的条带不存在，说明重组失败，那为什么会存在大条带？
“对”为pTKIP-cat,若重组成功，重组质粒是7kb

2014.0427 17菌PCR酶切.png

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1楼 2014-05-12 10:47:11

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ruchang2013

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

5楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-05-13 20:52:37
我一般都是20ul加1ul酶 37度4个小时。

谢谢，那么过夜酶切没影响吧，酶切不能超过多长时间啊

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7楼2014-05-14 14:35:27

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luwei13566

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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ruchang2013(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-12 17:58:15
ruchang2013: 金币+3, 谢谢，是不是酶切时间也过短啊！我这次将质粒重新酶切观察到2条带，一条在3kb~5kb,另一条带在2kb~3kb，质粒本身是4kb。我一般酶切3~4h。或者体系不对？我是20μL加0.5μL的酶。 2014-05-13 16:48:57

引物与重组质粒其他位置发生的非特异结合，有大条带很正常~
你的marker最大量程是5K而你的重组质粒是7K？marker不太合适，换一个更大一些的吧。不过从图上看连的不是你的基因，酶切偏小，PCR也没有，重组失败。~

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