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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 波谱分析 » 帮我看下这个HPLC图，为什么这个峰没有拉下来啊，验证纯度的
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我是黑宝猪

金虫 (正式写手)

[求助] 帮我看下这个HPLC图，为什么这个峰没有拉下来啊，验证纯度的已有2人参与

现在是说明这个不是纯品，但是这个峰都没有分开，再纯化难度是不是很大啊

帮我看下这个HPLC图，为什么这个峰没有拉下来啊，验证纯度的
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1楼2014-03-17 10:15:14
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fagui168

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 辛苦了 2014-03-17 11:13:32
我是黑宝猪: 金币+5 2014-03-17 15:03:43
你的图不太清晰，条件也没有说明。比较难判断。但是一般的前两个物质离得这么近，是很难分离的。但是只是少量的分离纯化，我觉得还是有可能的。可以换一些柱子试试，再摸索一些更适宜的流动相，如PH、比例、组成啥的因素都要考虑到。我也遇到过这样的情况，后来是通过手性柱子进行分子，也就弄到了一二十毫克。
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改变你不能改变的，适应你不能适应的
2楼2014-03-17 10:45:38
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北京秦方

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的实验条件不行，试着加点缓冲盐或者用梯度吧。
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3楼2014-03-17 11:10:02
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我是黑宝猪

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fagui168 at 2014-03-17 10:45:38
你的图不太清晰，条件也没有说明。比较难判断。但是一般的前两个物质离得这么近，是很难分离的。但是只是少量的分离纯化，我觉得还是有可能的。可以换一些柱子试试，再摸索一些更适宜的流动相，如PH、比例、组成啥的 ...

我用了DEAE-52和G-100，这是过了两根柱子的样品。接下来还要选什么啊
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4楼2014-03-17 13:45:55
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我是黑宝猪

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 北京秦方 at 2014-03-17 11:10:02
你的实验条件不行，试着加点缓冲盐或者用梯度吧。

第一个DEAE是梯度洗脱，G-100是缓冲液洗脱。样品就这样了
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5楼2014-03-17 13:46:41
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fagui168

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 我是黑宝猪 at 2014-03-17 13:45:55
我用了DEAE-52和G-100，这是过了两根柱子的样品。接下来还要选什么啊...

楼主做的是蛋白质类的大分子化合物。抱歉大分子的化合物和小分子的化合物在分离纯化上有较大的区别。我原来只是做天然产物的 分子量只是在200左右。对于你这类样品接下来要选用什么柱子、什么液相条件 我就不太清楚了。我知道我们的情况是根据样品的性质去选择柱子的，如碱性的样品 我们就选择碱性柱。 我觉得大分子的道理会不会跟小分子的情况有些相似的地方
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改变你不能改变的，适应你不能适应的
6楼2014-03-17 14:29:07
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我是黑宝猪

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fagui168 at 2014-03-17 14:29:07
楼主做的是蛋白质类的大分子化合物。抱歉大分子的化合物和小分子的化合物在分离纯化上有较大的区别。我原来只是做天然产物的 分子量只是在200左右。对于你这类样品接下来要选用什么柱子、什么液相条件 我就不太清楚 ...

我这个是糖蛋白，其实一般的分离纯化一个离子交换层析，一个凝胶也就够了的，我这个就这样了
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7楼2014-03-17 15:03:30
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海风^_^

木虫 (正式写手)

海风
按照图来看，你的峰型还好，说明不是柱子导致分不开，所以应该是你的色谱条件还没优化好，再去优化下流动相组分，pH，流速，梯度等条件，尽量分开峰就可以了。
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Afterall,tomorrowisanotherday!
8楼2014-03-18 11:44:29
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