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little-ant

新虫 (小有名气)

[求助] 我的药HPLC对称因子总是不满足药典要求，求助各位大侠指教一下！拜托！

我是新手，刚接触hplc，在摸索一个自己实验室合成的新药（单一化合物）的液相条件，C18色谱柱，样品用纯甲醇溶，流动相甲醇-水，1ml/min，但出现主峰分叉的情况，不要预柱测的话峰不分叉但峰都前沿，换别的柱子后（有接预柱）没有出现峰分叉，请问这些情况是否说明我的柱子柱头污染或塌陷导致的峰分叉？？？另外我用流动相溶解样品后测，峰型改善很多，无分叉或肩峰现象，但对称因子不满足要求，试过在流动相中加酸或盐，无论样品用纯甲醇溶还是用流动相溶，都还是得不到满意结果，请各位大侠说说我该怎么办呀，跪求各位的建议啊！小弟拜谢了！！
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dongjing120101

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1楼 2011-09-30 17:11:38
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ronzelau

铁虫 (小有名气)
★
karl2100(金币+1): 谢谢指教！ 2011-10-06 18:51:18
1、经过反复研究后（不同流动相、不同色谱柱），内标与主成分对称因子均接近0.95至1.05就可以了。实在达不到，峰形对称，方法验证能够过就可以的。建议你多看看USP中HPLC含量测定对系统适应性的要求，它更关注专属性，对对称因子要求没有这么严格。
2、你这个峰形没有问题，只要方法验证能够过。测定浓度也要合适，太大了（峰高做到上千）不可能达到要求的。
3、实在还想优化就换柱子。
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事在人为！
13楼2011-10-05 21:35:22
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普通回帖

大根草

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wtf66(金币+3): 谢谢参与 2011-09-30 23:23:59
little-ant(金币+1): 2011-10-01 01:07:30
1）首先你要确定，你所测得化合物是否真的是一纯的单一化合物
2）如果纯化合物的话，可不用预柱
3）以苯的甲醇溶液做试验样品，用的甲醇水（比例可在40-60%之间调节，使保留时间在15-20分钟左右），看看苯的峰是否分叉，如果也分叉，则说明你的柱子有问题，如果苯不分叉，则可能是你的样品或流动相体系有问题。
4)对称因子，可根据样品的性质（酸、碱等），调节流动相可以改善。
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2楼2011-09-30 22:56:49
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copydog

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wtf66(金币+1): 谢谢参与 2011-09-30 23:24:23
弱弱的问一下，药典要求是指以峰高计算含量时才要求对称因子在0.95-1.05吧，如果用峰面积计算应该没那么严格
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3楼2011-09-30 23:15:36
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copydog

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

弱弱的问一下，药典要求是指以峰高计算含量时才要求对称因子在0.95-1.05吧，如果用峰面积计算应该没那么严格
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4楼2011-09-30 23:16:50
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ronzelau

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 3Q 2011-10-01 20:36:06
karl2100:编辑内容 2011-10-01 20:36
1、你这个情况应该是保护住脏了，建议更换柱芯。
2、关于对称因子，外标法测定含量时尽量做到0.95-1.05的要求，根据化合物结构加入合适的添加剂可以解决不对称的问题，或者改用封端色谱柱。
3.你说的合成药物的液相条件，估计是测定有关物质，可以不必死守0.95-1.05之规定。专属性才最重要，但也与对称因子相关。

[ Last edited by karl2100 on 2011-10-1 at 20:36 ]
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事在人为！
5楼2011-10-01 00:09:43
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little-ant

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 大根草 at 2011-09-30 22:56:49:
1）首先你要确定，你所测得化合物是否真的是一纯的单一化合物
2）如果纯化合物的话，可不用预柱
3）以苯的甲醇溶液做试验样品，用的甲醇水（比例可在40-60%之间调节，使保留时间在15-20分钟左右），看看苯的峰是 ...

应该是比较纯的单一化合物，合成实验室测过纯度的，而且当我用45%甲醇溶解样品时测的主峰响应还是蛮高，只不过对称因子不满足而已~不过还是谢谢您的分析，对小弟来说非常重要，谢谢！！！
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6楼2011-10-01 01:10:58
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little-ant

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by copydog at 2011-09-30 23:15:36:
弱弱的问一下，药典要求是指以峰高计算含量时才要求对称因子在0.95-1.05吧，如果用峰面积计算应该没那么严格

额。。。这个小弟还真不清楚也。。。受教了。。。还是非常感谢~~
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7楼2011-10-01 01:12:16
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little-ant

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ronzelau at 2011-10-01 00:09:43:
1、你这个情况应该是保护住脏了，建议更换柱芯。2、关于对称因子，外标法测定含量时尽量做到0.95-1.05的要求，根据化合物结构加入合适的添加剂可以解决不对称的问题，或者改用封端色谱柱。3.你说的合成药物的液相 ...

可能以后会做这个化合物的药代实验，定量时应该都用内标法，肯定不会用峰高来定量，那请问这个化合物的对称因子是不是可以不用满足0.95-1.05的要求呢？
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8楼2011-10-01 01:17:42
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ronzelau

铁虫 (小有名气)
要看这个化合物的药代可以用哪种方法检测，如果用LC-MS的MRM模式或母离子模式，更加不受对称因子0.92-1.05的限制，如果用HPLC-UV可以满足测定要求，尽量满足对称因子0.92-1.05，但可以适当放宽要求，可以将设计测定浓度低点（至少满足定量限要求），一般可以显著改善对称因子，再有就是加改性剂改善对称性。如果用内标法，对内标物的峰形要求与主成分是一致的。国庆快乐！
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事在人为！
9楼2011-10-01 11:22:14
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little-ant

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ronzelau at 2011-10-01 11:22:14:
要看这个化合物的药代可以用哪种方法检测，如果用LC-MS的MRM模式或母离子模式，更加不受对称因子0.92-1.05的限制，如果用HPLC-UV可以满足测定要求，尽量满足对称因子0.92-1.05，但可以适当放宽要求，可以将设计测 ...

请问，您说的“如果用内标法，对内标物的峰形要求与主成分是一致的”是指内标峰和主成分峰要么都满足0.95-1.05的要求或要么都不满足而只接近这个范围就行？另外我的样品用45%甲醇溶解后用甲醇-水做流动相测的图如下，对称因子只接近0.8，试过在流动相在加酸或缓冲盐，但效果反而不如不加，请问大侠，这问题出在哪呢？？？祝国庆快乐！！
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10楼2011-10-01 14:00:35
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