应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC 用C18反相柱鉴定蛋白纯度，蛋白峰与溶剂峰混在一起怎么办？
121/2返回列表12下一页
查看: 3028  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

minmin-911

铜虫 (小有名气)

[求助] HPLC 用C18反相柱鉴定蛋白纯度，蛋白峰与溶剂峰混在一起怎么办？ 已有1人参与

用HPLC C18反相柱鉴定纯化蛋白质纯度，如图所示，是不是我的目标蛋白的极性太强，导致与溶剂峰混在一起，出峰太早？28min的峰为流动相的峰。那该怎么解决这个问题呢？菜鸟求救啊！
图1为空白对照： Tris-HCL 含NaCl 0.12M (pH 7.2)
图2为样品溶于Tris-HCL 含NaCl 0.12M (pH 7.2)

HPLC柱子：C18, 4.6 mm × 250 mm, 300 A
洗脱液：
Solvent A，1%乙酸水溶液
Solvent B，100%甲醇
洗脱条件：
0-10min 10%-30% B
10-20min 30%-70% B
20-40min 70% B
流速为 1.0 ml/min
检测波长为：280 nm
目标蛋白分子量为25KDa, pI为5左右。

图1 对照.jpg



图2 样品.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-30 16:47:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小娜-小宇

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
听不到: 金币+1, 感谢您的解答，欢迎常来分析版 2012-10-31 10:19:08
可以正相色谱分析呀，跑反相受溶剂峰影响分离度明显很低，根本说是分不开的呀。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
少吃多滋味，保持微笑
2楼2012-10-30 21:34:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

minmin-911

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小娜-小宇 at 2012-10-30 21:34:50
可以正相色谱分析呀，跑反相受溶剂峰影响分离度明显很低，根本说是分不开的呀。

那如果2-6min之间的那些小峰会不会是我的蛋白峰呢？
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-31 10:15:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小娜-小宇

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

跑个标准品吧。就确定几分出峰了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
少吃多滋味，保持微笑
4楼2012-10-31 13:29:32
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘小益

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得如果是你的蛋白质极性太强，你可以试着往流动相中加入一些离子对试剂，如TFA等，对于蛋白质的保留时间跟峰型都有较大的影响。同时对于蛋白质的检测波长，建议使用214nm，这个为酰胺键的吸收峰，对于蛋白质这个位置的吸收更强~~
赞一下 回复此楼
实验室小打杂
5楼2012-10-31 14:56:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的多大孔径的柱子，这么大的结构可能过不了柱子，量大了还会堵柱子。
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-01 23:20:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangrj920

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一般流动相B都用100%乙腈啊，换一下梯度。为了更好地分离纯化,必须对其分离条件再次进行优化。首先,对其分离梯度模式进行选择,
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-22 10:57:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jixiaoman12

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 刘小益 at 2012-10-31 14:56:13
我觉得如果是你的蛋白质极性太强，你可以试着往流动相中加入一些离子对试剂，如TFA等，对于蛋白质的保留时间跟峰型都有较大的影响。同时对于蛋白质的检测波长，建议使用214nm，这个为酰胺键的吸收峰，对于蛋白质这个 ...

请教你一个有关色谱柱的问题 凝胶色谱柱TSKgel2000SWXL和C18蛋白柱在分析蛋白质上有什么不同吗
赞一下 回复此楼
8楼2014-08-23 17:01:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘小益

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jixiaoman12 at 2014-08-23 17:01:21
请教你一个有关色谱柱的问题 凝胶色谱柱TSKgel2000SWXL和C18蛋白柱在分析蛋白质上有什么不同吗...

凝胶色谱柱是个体积排阻色谱柱，这种分离模式能很好的保持蛋白活性，也可以对蛋白进行质量分级，但是分离效果不好~C18柱分离效果比较好，但是蛋白保留太强，容易引起柱残留，有些蛋白会不可逆的被吸付，建议使用C4的反相柱~~
赞一下 回复此楼
实验室小打杂
9楼2014-08-23 21:54:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱叫外卖

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 刘小益 at 2014-08-23 21:54:55
凝胶色谱柱是个体积排阻色谱柱，这种分离模式能很好的保持蛋白活性，也可以对蛋白进行质量分级，但是分离效果不好~C18柱分离效果比较好，但是蛋白保留太强，容易引起柱残留，有些蛋白会不可逆的被吸付，建议使用C4 ...

学到了
回复此楼
10楼2014-11-06 11:16:22
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 minmin-911 的主题更新
121/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +9 不知道叫什么！ 2026-03-15 10/500 2026-03-16 10:04 by houyaoxu
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-15 7/350 2026-03-16 09:43 by 闲人终南山
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 求调剂，药学 +3 归零lbm 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:21 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 26考研求调剂 +5 丶宏Sir 2026-03-13 5/250 2026-03-13 13:05 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 纺织、生物、化学、材料相关专业招生了 +4 耶耶业 2026-03-09 7/350 2026-03-12 19:05 by Equinoxhua
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭