应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC 用C18反相柱鉴定蛋白纯度，蛋白峰与溶剂峰混在一起怎么办？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 3067  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

minmin-911

铜虫 (小有名气)

[求助] HPLC 用C18反相柱鉴定蛋白纯度，蛋白峰与溶剂峰混在一起怎么办？ 已有1人参与

用HPLC C18反相柱鉴定纯化蛋白质纯度，如图所示，是不是我的目标蛋白的极性太强，导致与溶剂峰混在一起，出峰太早？28min的峰为流动相的峰。那该怎么解决这个问题呢？菜鸟求救啊！
图1为空白对照： Tris-HCL 含NaCl 0.12M (pH 7.2)
图2为样品溶于Tris-HCL 含NaCl 0.12M (pH 7.2)

HPLC柱子：C18, 4.6 mm × 250 mm, 300 A
洗脱液：
Solvent A，1%乙酸水溶液
Solvent B，100%甲醇
洗脱条件：
0-10min 10%-30% B
10-20min 30%-70% B
20-40min 70% B
流速为 1.0 ml/min
检测波长为：280 nm
目标蛋白分子量为25KDa, pI为5左右。

图1 对照.jpg



图2 样品.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-30 16:47:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小娜-小宇

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
听不到: 金币+1, 感谢您的解答，欢迎常来分析版 2012-10-31 10:19:08
可以正相色谱分析呀，跑反相受溶剂峰影响分离度明显很低，根本说是分不开的呀。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
少吃多滋味，保持微笑
2楼2012-10-30 21:34:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

minmin-911

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小娜-小宇 at 2012-10-30 21:34:50
可以正相色谱分析呀，跑反相受溶剂峰影响分离度明显很低，根本说是分不开的呀。

那如果2-6min之间的那些小峰会不会是我的蛋白峰呢？
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-31 10:15:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小娜-小宇

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

跑个标准品吧。就确定几分出峰了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
少吃多滋味，保持微笑
4楼2012-10-31 13:29:32
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘小益

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得如果是你的蛋白质极性太强，你可以试着往流动相中加入一些离子对试剂，如TFA等，对于蛋白质的保留时间跟峰型都有较大的影响。同时对于蛋白质的检测波长，建议使用214nm，这个为酰胺键的吸收峰，对于蛋白质这个位置的吸收更强~~
赞一下 回复此楼
实验室小打杂
5楼2012-10-31 14:56:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的多大孔径的柱子，这么大的结构可能过不了柱子，量大了还会堵柱子。
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-01 23:20:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangrj920

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一般流动相B都用100%乙腈啊，换一下梯度。为了更好地分离纯化,必须对其分离条件再次进行优化。首先,对其分离梯度模式进行选择,
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-22 10:57:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jixiaoman12

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 刘小益 at 2012-10-31 14:56:13
我觉得如果是你的蛋白质极性太强，你可以试着往流动相中加入一些离子对试剂，如TFA等，对于蛋白质的保留时间跟峰型都有较大的影响。同时对于蛋白质的检测波长，建议使用214nm，这个为酰胺键的吸收峰，对于蛋白质这个 ...

请教你一个有关色谱柱的问题 凝胶色谱柱TSKgel2000SWXL和C18蛋白柱在分析蛋白质上有什么不同吗
赞一下 回复此楼
8楼2014-08-23 17:01:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘小益

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jixiaoman12 at 2014-08-23 17:01:21
请教你一个有关色谱柱的问题 凝胶色谱柱TSKgel2000SWXL和C18蛋白柱在分析蛋白质上有什么不同吗...

凝胶色谱柱是个体积排阻色谱柱，这种分离模式能很好的保持蛋白活性，也可以对蛋白进行质量分级，但是分离效果不好~C18柱分离效果比较好，但是蛋白保留太强，容易引起柱残留，有些蛋白会不可逆的被吸付，建议使用C4的反相柱~~
赞一下 回复此楼
实验室小打杂
9楼2014-08-23 21:54:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱叫外卖

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 刘小益 at 2014-08-23 21:54:55
凝胶色谱柱是个体积排阻色谱柱，这种分离模式能很好的保持蛋白活性，也可以对蛋白进行质量分级，但是分离效果不好~C18柱分离效果比较好，但是蛋白保留太强，容易引起柱残留，有些蛋白会不可逆的被吸付，建议使用C4 ...

学到了
回复此楼
10楼2014-11-06 11:16:22
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 minmin-911 的主题更新
121/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:07 by 啵啵啵0119
[考研] 367求调剂 +3 谢28 2026-03-30 3/150 2026-04-05 13:27 by huangmoli
[考研] 考研调剂 +6 15615482637 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:43 by yu221
[考研] 一志愿华北电力大学（北京），材料科学与工程学硕265，求调剂 +11 yelck 2026-04-03 12/600 2026-04-04 19:52 by dongzh2009
[考研] 一志愿沪985，326分求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-03 3/150 2026-04-04 11:16 by 悲伤的芋头
[考研] 400分求调剂 +3 尴尬且挠头 2026-04-04 3/150 2026-04-04 08:41 by jp9609
[考研] 335求调剂 +7 沈清璃 2026-04-03 7/350 2026-04-03 18:55 by lijunpoly
[考研] 0856，269分求调剂 +15 有学上就行求求� 2026-03-30 18/900 2026-04-03 16:50 by melodiousnow
[考研] 考研调剂 +8 不爱喝饮料 2026-04-03 8/400 2026-04-03 16:40 by Mistake-J
[基金申请] 请问共同通讯和共同一作的认可度问题 10+4 psa1234 2026-04-01 10/500 2026-04-03 11:08 by Kittylucky
[考研] 求调剂 +7 Aniyaio 2026-04-02 7/350 2026-04-02 16:42 by zzsw+
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +3 cs0106 2026-04-02 5/250 2026-04-02 11:37 by olim
[考研] 322求调剂 +5 熹僖XX 2026-03-31 6/300 2026-04-02 10:08 by 求调剂zz
[考研] 304求调剂 +12 素年祭语 2026-03-31 15/750 2026-04-01 22:41 by peike
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-30 16/800 2026-04-01 17:58 by 邱gl
[考研] 求调剂，一志愿北林食品与营养095500，301分，已过六级，有科研经历 +4 快乐储蓄罐 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:26 by JourneyLucky
[考研] 土木304求调剂 +5 顶级擦擦 2026-03-31 5/250 2026-04-01 08:15 by fdcxdystjk￥
[考研] 一志愿西交大080500材料学硕349 +6 jqx1258 2026-03-31 7/350 2026-03-31 21:08 by yuq
[考研] 求调剂 +8 11ggg 2026-03-30 8/400 2026-03-31 13:56 by nanaliuyun
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭