24小时热门版块排行榜    

查看: 3626  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

minmin-911

铜虫 (小有名气)

[求助] HPLC 用C18反相柱鉴定蛋白纯度,蛋白峰与溶剂峰混在一起怎么办? 已有1人参与

用HPLC C18反相柱鉴定纯化蛋白质纯度,如图所示,是不是我的目标蛋白的极性太强,导致与溶剂峰混在一起,出峰太早?28min的峰为流动相的峰。那该怎么解决这个问题呢?菜鸟求救啊!
图1为空白对照: Tris-HCL 含NaCl 0.12M (pH 7.2)
图2为样品溶于Tris-HCL 含NaCl 0.12M (pH 7.2)

HPLC柱子:C18, 4.6 mm × 250 mm, 300 A
洗脱液:
Solvent A,1%乙酸水溶液
Solvent B,100%甲醇
洗脱条件:
0-10min 10%-30% B
10-20min 30%-70% B
20-40min 70% B
流速为 1.0 ml/min
检测波长为:280 nm
目标蛋白分子量为25KDa, pI为5左右。

图1 对照.jpg



图2 样品.jpg
回复此楼
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用的多大孔径的柱子,这么大的结构可能过不了柱子,量大了还会堵柱子。
6楼2012-11-01 23:20:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

小娜-小宇

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
听不到: 金币+1, 感谢您的解答,欢迎常来分析版 2012-10-31 10:19:08
可以正相色谱分析呀,跑反相受溶剂峰影响分离度明显很低,根本说是分不开的呀。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
少吃多滋味,保持微笑
2楼2012-10-30 21:34:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

minmin-911

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小娜-小宇 at 2012-10-30 21:34:50
可以正相色谱分析呀,跑反相受溶剂峰影响分离度明显很低,根本说是分不开的呀。

那如果2-6min之间的那些小峰会不会是我的蛋白峰呢?
3楼2012-10-31 10:15:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小娜-小宇

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

跑个标准品吧。就确定几分出峰了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
少吃多滋味,保持微笑
4楼2012-10-31 13:29:32
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见