应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问我全长基因跑出来之后为什么要小100bp左右呢？
51/1返回列表
查看: 2102  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

louisjackson

金虫 (小有名气)

[求助] 请问我全长基因跑出来之后为什么要小100bp左右呢？ 已有3人参与

我想构建一个目的基因的过表达质粒，在设计目的基因全长引物后跑PCR，结果产物的位置要比实际的小100bp左右，不知道究竟是为什么。内参条带的位置没有什么问题，偏偏是目的基因的产物要小很多。我的全长引物是根据目的基因的CDS序列进行设计的，设计完以后BLAST也没有什么问题，恰恰就是我想要的区间，就是不知为何跑出来却变样了？！求教各位高手了，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
It'snotaboutskill,butaboutwill.
1楼 2014-05-08 22:20:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mehongyu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最后送去测序，我以前用过不同的loading，迁移也有不同

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2014-05-22 17:39:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序结果如何呢？agarose也没有那么精准，位置稍微有点偏差也比较正常
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-09 03:43:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louisjackson

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-09 03:43:28
测序结果如何呢？agarose也没有那么精准，位置稍微有点偏差也比较正常

昨天全部跑胶了，然后胶回收做上连接了，打算今天重新跑个PCR拿去测序呢！但愿是胶或者marker的问题，这可是构建质粒的关键一步啊！
赞一下 回复此楼
It'snotaboutskill,butaboutwill.
3楼2014-05-09 10:15:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by louisjackson at 2014-05-09 10:15:53
昨天全部跑胶了，然后胶回收做上连接了，打算今天重新跑个PCR拿去测序呢！但愿是胶或者marker的问题，这可是构建质粒的关键一步啊！...

关键是看有没有条带，单一与否，构建质粒，之后转化，提取，酶切，看图谱，有时候大小稍微有偏差，测序之后是没有问题的
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-13 02:13:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭