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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 是否为引物二聚体
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lh318

新虫 (初入文坛)

[求助] 是否为引物二聚体 已有3人参与

DGGE后切胶，溶出DNA，用和原来相同的体系PCR，琼脂糖检验的图，maker最小为250bp，最大为2000bp，原来的体系PCR产物应在600bp左右，想请问亮的条带是引物二聚体吗？如果是的话，有哪些方法可以消除呢？为什么有些泳道有两个亮的条带呀？谢谢

是否为引物二聚体
PCR.JPG
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1楼 2014-04-29 16:20:03
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-30 10:38:46
lh318: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-05-07 16:11:19
引物二聚体的亮度应该一样才对啊，貌似杂带。
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2楼2014-04-30 09:29:17
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-30 10:38:50
lh318: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-05-07 16:11:46
引物二聚体的话也太亮了，完全没P出来。切胶回收没问题吧？
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2014-04-30 09:41:42
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lh318

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by j2 at 2014-04-30 09:41:42
引物二聚体的话也太亮了，完全没P出来。切胶回收没问题吧？

切完胶，溶于灭菌超纯水。80度水浴20min，4度过夜后PCR的。有同学用这个方法做，测序成功了。
我之前是切完胶，溶于灭菌水和TE，然后煮沸10min后PCR，也送去测序过，当时十几条条带，只测出来两条，说是其他存在重叠峰的问题
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4楼2014-04-30 13:01:43
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lh318

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-04-30 09:29:17
引物二聚体的亮度应该一样才对啊，貌似杂带。

杂带的话。是什么原因呢？是实验过程中有污染吗？
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5楼2014-04-30 13:03:40
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by lh318 at 2014-04-30 13:01:43
切完胶，溶于灭菌超纯水。80度水浴20min，4度过夜后PCR的。有同学用这个方法做，测序成功了。
我之前是切完胶，溶于灭菌水和TE，然后煮沸10min后PCR，也送去测序过，当时十几条条带，只测出来两条，说是其他存在重 ...

测序有重叠峰应该就是电泳2条带那种。测序测出来的长度符合吗？切胶切的是否没含杂带？如果切宽了有可能把不明显的另一条也切下来。
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
6楼2014-05-01 08:55:00
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探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最下面的那一条带  应该是杂引物二聚体     你 看你的Marker应该就能看出来
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相信什么才会得到什么
7楼2014-05-01 21:14:27
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lh318

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by j2 at 2014-05-01 08:55:00
测序有重叠峰应该就是电泳2条带那种。测序测出来的长度符合吗？切胶切的是否没含杂带？如果切宽了有可能把不明显的另一条也切下来。...

昨天又PCR了一次，减少了体系中引物的量，增加了模板DNA的量，上午跑琼脂糖检验，没有明显亮的条带。。好郁闷啊。。
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8楼2014-05-07 16:10:38
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