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AdamCheng

银虫 (小有名气)

[求助] 提取基因组DNA发生一件很奇怪的事情 已有8人参与

提取基因组DNA发生一件很奇怪的事情

本人新手，刚开始接触分子实验，实验室也是刚开始做这方面实验

酚氯仿法提取基因组DNA，右边四个是不同物种的样品，剩下两个是λ/HindIII DNA Marker,
基因组DNA应该跑的比marker最大的条带还慢，但是这个似乎有点问题，请问这是什么原因。
还有我之前用酚氯仿法提取DNA效果一直不好，条带很弱或者无条带，一直搞不清为什么。

我的电泳跑的很糟糕。。。。
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好好学习天天向上
1楼 2014-04-22 09:58:26
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

754122910

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-04-22 23:08:16
可能是在抽屉上清液的时把有机相抽到了收集的离心管里，造成难溶解DNA，所以最后是看不到贪图条带的。或者是说操作的时候没有主要以细节，导致污染
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AdamCheng
7楼2014-04-22 21:08:48
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kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-22 12:06:52
建议用试剂盒，自己弄不好原因太多，不好找。
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AdamCheng
3楼2014-04-22 12:04:51
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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AdamCheng: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-23 15:18:12
不管采用试剂盒还是酚氯仿手工抽提，获得基因组DNA都有断裂现象，通常都不会得到完整的基因组DNA，所以条带比预期的小些。建议将抽提的基因组DNA为模板，进行PCR或者后续实验，只要能达到实验要求，就可以了，如果想得到完整性更好的基因组DNA，建议采用磁珠法基因组DNA抽提试剂盒，完整性更好，得率更高，现在试剂盒很便宜了，操作方便，快捷。
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AdamCheng
rainwater
10楼2014-04-23 11:37:02
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-04-22 23:08:09
我用酚氯仿第一次就提的挺好的，如果配的溶液没有问题的话就是手法问题了，酚氯仿萃取之前的步骤混匀的时候摇剧烈点，之前步骤都是除杂志的，蛋白啊什么的，所以摇剧烈点，否则有可能DNA没有跟蛋白分开而跟着蛋白被除去了，导致条带很弱

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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AdamCheng
Someone
6楼2014-04-22 13:57:11
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AdamCheng

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 754122910 at 2014-04-22 21:08:48
可能是在抽屉上清液的时把有机相抽到了收集的离心管里，造成难溶解DNA，所以最后是看不到贪图条带的。或者是说操作的时候没有主要以细节，导致污染

主要还是操作的问题，以后用试剂盒试试，谢谢
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好好学习天天向上
15楼2014-04-23 15:13:48
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grape_vine

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by AdamCheng at 2014-04-22 13:40:21
我不明白为什么我提的基因组长度在9000多bp附近，也没有明显的弥散啊。就在那个位置有条带，我应该没有污染。...

现在这个电泳结果，不能说你的基因组长度就是9k，电泳本身也有分辨率的问题，大的片段更难得分的开进行准确的大小评判，这也是为什么我们跑ladder的时候，越大的条带之间距离越近，超过10000bp的带很多时候都分不开，你可以说这个位置的分子量大小是10k，也可以说是100k，都没有实际意义，你的DNA除了量不是很大以外，其他的都没有问题，能用就行了！
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AdamCheng
21楼2014-04-26 11:00:54
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普通回帖

windleakey

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-22 12:06:48
同样新手，我用酚氯仿抽提经常也总提不好，老师提的就很好，可能是手法的问题吧。用试剂盒吧，感觉好提多了。
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AdamCheng AdamCheng
2楼2014-04-22 11:53:13
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AdamCheng

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by windleakey at 2014-04-22 11:53:13
同样新手，我用酚氯仿抽提经常也总提不好，老师提的就很好，可能是手法的问题吧。用试剂盒吧，感觉好提多了。

我不明白为什么我提的基因组长度在9000多bp附近，也没有明显的弥散啊。就在那个位置有条带，我应该没有污染。
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好好学习天天向上
4楼2014-04-22 13:40:11
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AdamCheng

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-22 12:04:51
建议用试剂盒，自己弄不好原因太多，不好找。

我不明白为什么我提的基因组长度在9000多bp附近，也没有明显的弥散啊。就在那个位置有条带，我应该没有污染。
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好好学习天天向上
5楼2014-04-22 13:40:21
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对于基因组提取经验不多，所以无法提供帮助。但是不明白你的两个marker为什么要放在一块，最起码放两边嘛
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AdamCheng
多情总被无情扰。。。愁
8楼2014-04-23 09:46:28
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念筱苏

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是用的CTAB法提取的么？里面会用到酚氯仿异戊醇，得再用氯仿异戊醇（24:1）除去里面的酚，我提取DNA都是用CTAB法，有成功也有失败，影响因素太多了。估计和个人手法有关吧。

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2014-04-23 10:07:36
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