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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取基因组DNA发生一件很奇怪的事情
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field0073

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先要考虑你的组织材料，选择合适的提取方法。电泳显示的条带无弥散表示dna的完整度较好，并不能很从分的说明dna的污染情况。按照你所说的情况，你的基因组跑得比较慢，应该是有残留蛋白附着，建议多用氯仿抽提一次看看效果。
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AdamCheng
11楼2014-04-23 14:39:02
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AdamCheng

银虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 念筱苏 at 2014-04-23 10:07:36
是用的CTAB法提取的么？里面会用到酚氯仿异戊醇，得再用氯仿异戊醇（24:1）除去里面的酚，我提取DNA都是用CTAB法，有成功也有失败，影响因素太多了。估计和个人手法有关吧。
...

不是，用的是酚氯仿法，经常失败。。。
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好好学习天天向上
12楼2014-04-23 15:10:40
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AdamCheng

银虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by jiaolong11a at 2014-04-23 09:46:28
对于基因组提取经验不多，所以无法提供帮助。但是不明白你的两个marker为什么要放在一块，最起码放两边嘛

多谢提醒，确实应该放两边的，我刚开始不知道
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好好学习天天向上
13楼2014-04-23 15:11:35
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AdamCheng

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6楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-22 13:57:11
我用酚氯仿第一次就提的挺好的，如果配的溶液没有问题的话就是手法问题了，酚氯仿萃取之前的步骤混匀的时候摇剧烈点，之前步骤都是除杂志的，蛋白啊什么的，所以摇剧烈点，否则有可能DNA没有跟蛋白分开而跟着蛋白被 ...

谢谢，看来我手法还需加强，以后试试试剂盒了。
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好好学习天天向上
14楼2014-04-23 15:12:08
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AdamCheng

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7楼: Originally posted by 754122910 at 2014-04-22 21:08:48
可能是在抽屉上清液的时把有机相抽到了收集的离心管里，造成难溶解DNA，所以最后是看不到贪图条带的。或者是说操作的时候没有主要以细节，导致污染

主要还是操作的问题，以后用试剂盒试试，谢谢
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15楼2014-04-23 15:13:48
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AdamCheng

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10楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-04-23 11:37:02
不管采用试剂盒还是酚氯仿手工抽提，获得基因组DNA都有断裂现象，通常都不会得到完整的基因组DNA，所以条带比预期的小些。建议将抽提的基因组DNA为模板，进行PCR或者后续实验，只要能达到实验要求，就可以了，如果想 ...

应该是我操作手法的问题，以后试试用试剂盒
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好好学习天天向上
16楼2014-04-23 15:15:42
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AdamCheng

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11楼: Originally posted by field0073 at 2014-04-23 14:39:02
首先要考虑你的组织材料，选择合适的提取方法。电泳显示的条带无弥散表示dna的完整度较好，并不能很从分的说明dna的污染情况。按照你所说的情况，你的基因组跑得比较慢，应该是有残留蛋白附着，建议多用氯仿抽提一次 ...

好的，谢谢啦，
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好好学习天天向上
17楼2014-04-23 15:16:31
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AdamCheng

银虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-22 12:04:51
建议用试剂盒，自己弄不好原因太多，不好找。

好的，谢谢啦
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18楼2014-04-23 15:17:00
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AdamCheng

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2楼: Originally posted by windleakey at 2014-04-22 11:53:13
同样新手，我用酚氯仿抽提经常也总提不好，老师提的就很好，可能是手法的问题吧。用试剂盒吧，感觉好提多了。

谢谢，加油
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19楼2014-04-23 15:17:35
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2楼: Originally posted by windleakey at 2014-04-22 11:53:13
同样新手，我用酚氯仿抽提经常也总提不好，老师提的就很好，可能是手法的问题吧。用试剂盒吧，感觉好提多了。

谢谢，加油
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20楼2014-04-23 15:17:44
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