24小时热门版块排行榜    

查看: 767  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qinghuaihulu

铁虫 (小有名气)

[求助] 细菌real time RT-PCR 已有2人参与

我从一种植物的果荚上洗脱下来细菌菌体,提取RNA,欲通过荧光PCR的方法来确定菌体中某个基因的表达情况,这个基因部分片段的普通PCR引物已经知道。请哪位给予指导下,我如何来完成这个实验。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

vanilla
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qinghuaihulu

铁虫 (小有名气)

那RNA需要逆转录为cDNA吧,用oligdt?还是有一步到位的试剂盒?
vanilla
4楼2014-04-18 21:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

wangyue115

木虫 (正式写手)

冰山火种

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-17 00:52:05
普通PCR引物扩增的序列有多长?如果小于500bp,可以考虑直接用这个引物,如果不合适,就自己设计扩增片段为200-300bp的引物。
2楼2014-04-17 00:14:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jacob_24

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很简单,首先分析一下引物  看看合不合适 不合适自己设计
看你是选用染料(SYBR Green or SYTO9?)
还是探针(分子信标 or置换探针 or Taq Man 水解探针 or ...)
接下来确定扩增体系:
优化引物 ,buffer,酶,Mg2+,探针用量及 退火温度,
最后看看扩增曲线 用-ΔΔCt看一下表达情况,AbI的机子可以直接把分析结果倒出来 很方便。
其他的BioRad or RoChe貌似也可以,试试看
CCC
3楼2014-04-17 11:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿天大材料与化工(085600)总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀~
[考研] 材料专硕英一数二306 +5 z1z2z3879 2026-03-18 5/250 2026-03-19 07:43 by BruceLiu320
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-17 7/350 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 9/450 2026-03-18 15:31 by vgtyfty
[考研] 0854可跨调剂,一作一项核心论文五项专利,省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见