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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 请问在大肠杆菌中表达蛋白时会不会只表达一段目的蛋白？怎么解决呢？求高人指点
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cassiett90

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问在大肠杆菌中表达蛋白时会不会只表达一段目的蛋白？怎么解决呢？求高人指点 已有5人参与

我最近一直在试着用大肠杆菌表达一个116个氨基酸的蛋白，前面加了个132个氨基酸的sumo标签，再前面是his标签，放在pET28a中表达，目的蛋白总长度为27.6kD，但跑胶却总是只能得到20kD的主条带，质谱显示只有sumo和那116个里面的前面一截目的蛋白，后面的都对不上，但基因测序没有一点问题，这可能是为什么呢？蛋白表达到一半自己停下了？？去表达其他的了？？怎么会这样呢。。求高人指教啊！！！小女子感激不尽！！！
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1楼 2014-04-13 10:07:33
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你不嫌麻烦可以把SUMO加在一段，然后在另外一段加上HIS，两种方法纯化出来的蛋白就是你想要的全长的蛋白
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行至水穷处，坐看云起时
5楼2014-04-13 18:41:51
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

C-端加入SUMO，N端加入HIS，或者反过来，这样你就可以把你的蛋白夹在两者中间，SUMO纯化的保证C端完整，HIS纯化保证N端完整，不是让你两次表达。
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
10楼2014-04-13 22:31:38
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