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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 这是我提取的RNA，跑胶后的照片，麻烦大家帮我看看，有啥问题~~~
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yanglei174

金虫 (小有名气)

[求助] 这是我提取的RNA，跑胶后的照片，麻烦大家帮我看看，有啥问题~~~已有6人参与

在线等，谢谢大家了~~~
这是我提取的RNA，跑胶后的照片，麻烦大家帮我看看，有啥问题~~~
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1楼2014-04-10 09:21:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

不爱做实验

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2014-04-10 13:35:54
发生降解。。。另外，marker的条带也不是很清晰，可能也有胶的问题。
几点建议：
1.尽最大可能避免实验中使RNA降解的因素：以前试过待手套和口罩操作，后来也试过直接提取。
  比如，不要对着药品和EP管等呼吸， ...

打错字。。。不要对着药品和EP管等呼吸，这可能都。。。会。。。导致降解
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4楼2014-04-10 13:40:20
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yanglei174(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-14 17:34:10
有点降解了，杂质没除干净

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-04-10 14:08:29
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普通回帖

信仰爱

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yanglei174(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-10 12:50:00
有降解了，实验操作上还学要多注意防止降解，
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2楼2014-04-10 11:23:17
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yanglei174: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-11 07:54:51
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-14 17:33:39
发生降解。。。另外，marker的条带也不是很清晰，可能也有胶的问题。
几点建议：
1.尽最大可能避免实验中使RNA降解的因素：以前试过待手套和口罩操作，后来也试过直接提取。
  比如，不要对着药品和EP管等呼吸，这可能都不会导致降解（不过我觉得这有点要求太过了吧）
  更不能手直接拿EP管，需要戴一次习惯手套，经常更换。
2.药品要专用，且时间最好别太久
3.电泳时的胶现用现做，缓冲液也是现用现配，
4.叶片研磨要充分，操作要迅速
5.另外，有时候，就是很奇怪，注意了很多细节，最后还是不行，不过还是得小心操作
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3楼2014-04-10 13:35:54
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userhung

禁虫 (文学泰斗)

木虫博士

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有降解~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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6楼2014-04-10 15:27:32
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yanglei174

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2014-04-10 13:35:54
发生降解。。。另外，marker的条带也不是很清晰，可能也有胶的问题。
几点建议：
1.尽最大可能避免实验中使RNA降解的因素：以前试过待手套和口罩操作，后来也试过直接提取。
  比如，不要对着药品和EP管等呼吸， ...

那不是应该有三条带的吗，我怎么就两条呢
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7楼2014-04-11 07:55:18
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不爱做实验

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yanglei174 at 2014-04-11 07:55:18
那不是应该有三条带的吗，我怎么就两条呢...

一般电泳RNA时间不会太长，否则也易发生降解，因此，一般粗略的看出现所谓的两个条带我觉得是提出RNA了。。。但是实际，应该是看到三个，据了解，第三个条带是5s和什么在一起，分不开。。。对此我真是不求甚解了，之前看过，说不止三个条带。。。
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8楼2014-04-11 08:40:24
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hexia313

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你这提的是什么细胞，第一孔的降解比较严重，2孔PCR什么的还可以用
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9楼2014-04-14 12:37:11
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mashunyao1

铁虫 (小有名气)
★
yanglei174(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-14 17:34:22
你的上样量可能比较小，或者是照胶的时候亮度没调好，拖尾现象挺严重，降解比较厉害，注意好试验环境，尽量防治污染。
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10楼2014-04-14 15:39:15
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