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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取结果分析
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张小逸

铜虫 (小有名气)

[求助] RNA提取结果分析 已有7人参与

提取了动物组织的RNA，28S和18S的条带很清晰，28比18也亮，并且无5S条带。但是在28S与点样孔之间有较亮条带，是否为DNA或蛋白污染？此RNA能否用于反转录，或继续下游PCR实验？
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1楼 2013-12-15 11:38:46
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有时候没有5S是因为跑胶过长，EB往反方向跑，染色弱导致，一或电泳上样量不足

28S与点样孔之间有较亮条带，是genomic DNA的污染，最好先消化掉DNA，再进行后续的逆转录和PCR实验
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-12-15 23:17:57
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 20:02:22
可能是蛋白质，多糖或者dna染料太多都会造成加样孔亮
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但愿人长久
10楼2013-12-17 08:36:03
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-15 15:44:32
发个图片上来比较好。不管电泳时是否看得见gDNA，做反转录前都需要用DNase消化RNA。
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2楼2013-12-15 13:08:41
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-15 15:44:40
用什么方法提的？
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3楼2013-12-15 14:33:41
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小木虫刘树青

木虫 (著名写手)

夜未眠
5S带可能降解了
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世界上只有一种真正的英雄主义，那就是看清生活的真相之后，依然热爱生活。
4楼2013-12-15 20:14:19
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xv1215

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能不能用于下面的实验还是测一下od值比较保险，1.8-2.0左右基本可用

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2013-12-16 08:21:24
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gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加样空量亮是蛋白污染，RNA提取的好与坏，除了胶图还要看260、280、230的比值。
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7楼2013-12-16 08:46:12
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张小逸

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-15 13:08:41
发个图片上来比较好。不管电泳时是否看得见gDNA，做反转录前都需要用DNase消化RNA。

我用的Takara的 PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)试剂盒，里面的gDNA Eraser和5×gDNA Eraser Buffer反应42度2分钟，是不是就能很好的去除gDNA？
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8楼2013-12-16 10:18:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 张小逸 at 2013-12-16 10:18:27
我用的Takara的 PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)试剂盒，里面的gDNA Eraser和5×gDNA Eraser Buffer反应42度2分钟，是不是就能很好的去除gDNA？...

没用过这个kit，不知道效果如何。gDNA是否完全消化干净要自己检测。
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9楼2013-12-16 16:28:47
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