| 查看: 2056 | 回复: 12 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
关于原核表达载体构建，跪求~~~~ 已有2人参与
|
||||
|
生物新手，有两个问题想求助一下： 1.现在要构建一个原核表达载体，我查的有两种方案，第一种是将目的基因PCR后直接连接到表达载体，再转化到表达菌株中，第二种是把目的基因连接到克隆载体，再酶切后再连接到表达载体，最后再转化到表达菌种，请问第二步中的克隆菌株有必要嘛？哪种方案比较可行？ 2.在得到cDNA后，第一种是通过设计引物反转录得到目的基因的DNA，再对它双酶切，第二种是设计两端含有酶切位点的引物并添加保护碱基，再通过反转录直接得到双酶切后的目的基因，哪种比较可行？谢谢~~~~~~~~~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有214人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做了原核表达，表达量很低，求助~~
已经有16人回复
- 原核表达引物设计求助~
已经有5人回复
- 荧光蛋白原核表达质粒
已经有13人回复
- 原核表达载体目的片段终止密码子后出现ATG
已经有12人回复
- 基因的原核表达
已经有10人回复
- 放线菌是原核还是真核的？
已经有7人回复
- 原核表达做不出来了！
已经有15人回复
- 原核表达载体蛋白诱导
已经有18人回复
- 真核表达载体的选择
已经有4人回复
- 如何进行表达载体构建
已经有25人回复
- 原核表达载体构建时卡那浓度是多少？
已经有6人回复
- 原核表达载体构建老不成功，求助！
已经有20人回复
- 原核表达载体的构建
已经有37人回复
- 构建了个基因的表达载体，发现有一个氨基酸发生突变
已经有10人回复
- 原核表达载体构建，测序不成功
已经有20人回复
- 真核表达载体 原核 区别与扩增
已经有8人回复
- 关于SiRNA表达载体构建的问题
已经有9人回复
- 表达载体的构建
已经有17人回复
- 【求助/交流】酵母表达和原核表达，在技术上有什么不同？
已经有6人回复
- 【求助/交流】原核表达载体pGEX-4T-1对应的表达菌株
已经有6人回复
9楼2014-04-30 10:24:59
biostar2009
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +220 - MolEPI: 20
- 应助: 231 (大学生)
- 金币: 10391.9
- 散金: 387
- 红花: 63
- 帖子: 540
- 在线: 151.9小时
- 虫号: 2811882
- 注册: 2013-11-19
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lihuahan(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励热心回帖交流 2014-04-01 13:29:22
感谢参与，应助指数 +1
lihuahan(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励热心回帖交流 2014-04-01 13:29:22
|
混乱，一篇混乱。 第一个问题 不明白为什么还有个“克隆质粒”？ 你要表达某个基因，你就直接把这段基因片段插到你的表达载体就可以了。克隆载体是最基本的载体，可以装片段的载体几乎都可以叫克隆载体，表达载体至少可以说是“可以表达的克隆载体”。 倒是后面一段可能需要点理解，那为什么表达载体要经过“克隆菌”到“表达菌”的过程呢？ 一般而言，表达载体都是在克隆菌里面做克隆鉴定的，不建议直接转化表达菌，因为表达载体在表达菌中的情况比较复杂，可能因为泄露表达等原因导致表达菌生长受阻。 第二个问题 这个“反转录"不是这样乱用的 我不太明白你的意思 你所谓的cDNA，就是mRNA做反转录之后的cDNA第一链， ”通过反转录直接得到双酶切后的目的基因“ 这到底是什么意思？ |
2楼2014-04-01 09:18:55
xiaopeiliang
金虫 (小有名气)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 349.1
- 散金: 75
- 红花: 6
- 帖子: 151
- 在线: 70.4小时
- 虫号: 1044898
- 注册: 2010-06-21
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
3楼2014-04-01 17:30:35
4楼2014-04-01 22:39:50
5