应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 关于原核表达载体构建，跪求~~~~
51/1返回列表
查看: 2057  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lihuahan

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于原核表达载体构建，跪求~~~~ 已有2人参与

生物新手，有两个问题想求助一下：
1.现在要构建一个原核表达载体，我查的有两种方案，第一种是将目的基因PCR后直接连接到表达载体，再转化到表达菌株中，第二种是把目的基因连接到克隆载体，再酶切后再连接到表达载体，最后再转化到表达菌种，请问第二步中的克隆菌株有必要嘛？哪种方案比较可行？
2.在得到cDNA后，第一种是通过设计引物反转录得到目的基因的DNA，再对它双酶切，第二种是设计两端含有酶切位点的引物并添加保护碱基，再通过反转录直接得到双酶切后的目的基因，哪种比较可行？谢谢~~~~~~~~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-01 08:59:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-01 18:31:09
第一种方法吧，常规的方法，不过克隆载体完全可以不用啊，PCR完后直接酶切连到表达载体上就行，中间的克隆菌株还是要保存下的，因为质粒在克隆菌株中要稳定的多，不会重排/丢失，直接转到表达菌中不太好
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-04-01 17:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lihuahan(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励热心回帖交流 2014-04-01 13:29:22
混乱，一篇混乱。
第一个问题
不明白为什么还有个“克隆质粒”？
你要表达某个基因，你就直接把这段基因片段插到你的表达载体就可以了。克隆载体是最基本的载体，可以装片段的载体几乎都可以叫克隆载体，表达载体至少可以说是“可以表达的克隆载体”。
倒是后面一段可能需要点理解，那为什么表达载体要经过“克隆菌”到“表达菌”的过程呢？
一般而言，表达载体都是在克隆菌里面做克隆鉴定的，不建议直接转化表达菌，因为表达载体在表达菌中的情况比较复杂，可能因为泄露表达等原因导致表达菌生长受阻。
第二个问题
这个“反转录"不是这样乱用的
我不太明白你的意思
你所谓的cDNA，就是mRNA做反转录之后的cDNA第一链，
”通过反转录直接得到双酶切后的目的基因“
这到底是什么意思？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-04-01 09:18:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuahan

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-01 09:18:55
混乱，一篇混乱。
第一个问题
不明白为什么还有个“克隆质粒”？
你要表达某个基因，你就直接把这段基因片段插到你的表达载体就可以了。克隆载体是最基本的载体，可以装片段的载体几乎都可以叫克隆载体，表达载体 ...

1.我看到有的人做的时候是在得到目的基因的DNA后，把DNA插入到pMD中，再对pMD双酶切，然后再对表达载体双酶切，把从pMD双酶切得到的目的片段再插入表达载体。
2.就是再得到cDNA第一链后，设计的引物再反转录PCR后可直接得到带有双酶切位点的目的基因。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-04-01 22:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuahan

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2014-04-01 17:30:35
第一种方法吧，常规的方法，不过克隆载体完全可以不用啊，PCR完后直接酶切连到表达载体上就行，中间的克隆菌株还是要保存下的，因为质粒在克隆菌株中要稳定的多，不会重排/丢失，直接转到表达菌中不太好

中间的克隆菌株是啥？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-01 22:41:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +12 不知道叫什么！ 2026-03-15 14/700 2026-03-16 16:45 by 我的船我的海
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 309求调剂 +5 花与叶@ 2026-03-10 5/250 2026-03-16 14:13 by 哦哦123
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿江南大学环境工程085701 +3 Djdjj12 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:31 by JourneyLucky
[考研] 0805，333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 求调剂（材料与化工327） +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭