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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 有关TAKARA T4连接酶
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f847852005

金虫 (初入文坛)

[求助] 有关TAKARA T4连接酶 已有3人参与

有人用过TAKARA的T4连接酶么？他的反应体系、反应时间、反应温度和一般的T4一样么  ？为什么说明书上什么都没有
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好好读文献好好做实验
1楼 2014-03-19 20:31:33
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-20 16:52:32
载体：x
片段：y
T4: 1
5XT4 Buffer: 2
水：补至10ul
平端连接：22-25度2h或者16度过夜
粘端连接：22-25度10min
这是说明书上的说明。

不过一般都用16度过夜，除非很急，用22度2-3小时。
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3楼2014-03-20 16:25:47
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
f847852005(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-03-31 19:22:45
连接体系一样，效果也还算可以，我一直用takara的
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2楼2014-03-20 15:38:50
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
载体与片段的摩尔比为1:3-1:10.
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4楼2014-03-20 16:26:28
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木木一家人

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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f847852005(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖交流经验！ 2014-03-31 19:23:00
我最近用了这个酶。25ul和50ul体系都做了。但是效果没有50ul的好，具体如下：buffer  5 ul；T4连接酶2ul；我连接的序列连接比例设置为1:2,分别是5pmol和10pmol（根据自己的需要再调整吧）。。之前也做了16度过夜，但是发现没有37度 半小时 效果好。。推荐使用37度水浴半小时。。希望能帮到你。
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5楼2014-03-20 20:57:50
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