| 查看: 1456 | 回复: 15 | |||
[交流]
奇怪的连接反应
|
|||
| 大家好！近来在做目的基因和质粒的连接，在转化时出现了一个奇怪的现象，请教大家分析下。我回收的目的基因和载体都还是比较纯的（用的是OMEGA试剂盒提取的)。我用TAKARA的solution1，16摄氏度，45min连接，之后直接转化DH5阿尔法，我做了全菌的PCR，再提取质粒PCR结果都有正确的结果，但是我跑质粒和双酶切的核算电泳胶都没有条带。这是问什么呢？！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有55人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 糠醇树脂的合成及固化机理
已经有4人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 很奇怪的连接产物
已经有5人回复
- DNA的连接反应
已经有5人回复
- 转化连接遇到的奇怪的事！
已经有3人回复
- 一个奇怪的DA反应
已经有23人回复
- 【求助】石英管反应器的连接问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】聚乙二醇在连接反应中的作用
已经有18人回复
- 【求助/交流】连接转化时遇到的奇怪问题 求解
已经有12人回复
- 【讨论】过渡态能量可能比反应物低吗？无势垒反应过程是否也会存在过渡态？
已经有5人回复
- 【求助】关于10-溴代癸酸与NaOH反应的奇怪现象，请高手赐教
已经有11人回复
- 【请教】EDC作为连接剂反应机理，实验有所进展了
已经有28人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
中国科学院杭州医学研究-常皓研究员课题组博士后招聘
+1/276
-
招收材料与化学相关专业硕士研究生
+1/80
-
福建农林大学材料工程学院高分子材料课题组招生
+1/79
-
中国药科大学211-课题组招收2026博士/硕士-有机化学合成-26年9月入学（还有名额）
+1/48
-
南方油校——资源与环境专硕招生，化学环境生物类专业均可，就业好，有专业壁垒
+1/44
-
招收2026年材料与化工专硕调剂，山东省属重点大学，过国家线即可调剂，名额充足
+2/42
-
【分享】招收08工学硕士（要求过国家线）
+1/38
-
欢迎08或部分07开头的有缘人报考
+1/35
-
哈尔滨工业大学-大湾区大学2026年联合培养博士研究生春季招生-报名3月31号截至
+1/20
-
2026年材料/冶金/化工硕士调剂-上海大学全国重点实验室-激光冶金与硅基材料制备
+1/17
-
招收专业代码08的学硕！
+1/14
-
双一流湘潭大学化工学院招收化工、能源动力、工程热物理相关研究生调剂
+1/14
-
诚挚招生（硕士+博士）
+1/9
-
【2026调剂】南方科技大学-深圳理工大学-中科院 联培086000免疫方向(26.9入学)
+1/8
-
宁波东方理工大学余鹏课题组2026年上海交大联培博士生、博士后、科研助理招聘
+1/8
-
宁波东方理工大学余鹏课题组2026年上海交大联培博士生、博士后、科研助理招聘
+1/5
-
MDPI下IJMS投稿 pending editor decision 9天
+1/2
-
【科研干货】纳米抗体凭什么成为实验室“新宠”？附优质制备服务商参考
+1/1
-
湘潭大学教师招聘
+1/1
-
北京高校副校长团队招收机械类，环境类学硕和专硕
+1/1
★ ★ ★
cuicchao(金币+2): 谢谢参与
kx444555: 金币+2, 很详细 2013-03-10 10:30:50
cuicchao(金币+2): 谢谢参与
kx444555: 金币+2, 很详细 2013-03-10 10:30:50
|
全菌PCR有可能是连接转化过程中连接使用的片段有沾到菌体上造成污染 至于卤煮说提取质粒后PCR也有片段，这个看来可以排除上面的情况，但是会怀疑有可能是PCR使用的试剂有污染，建议卤煮设置负对照，譬如空载为模板的，以及不加入模板的，如果负对照有P出，则证明有污染。 卤煮所谓的跑质粒没有条带是什么意思？是没有大小正确的目的带还是神码都没有？ 如果是没有目的带的话，也许是超螺旋结构导致重组子质粒和空载质粒跑胶距离差别不大，建议跑远一点，凝胶浓度也可以调整一下。 双酶切鉴定算是可下结论的鉴定，卤煮可以考虑排除酶失活，反应体系错误，质粒没有抽取好等情况 如果卤煮手抽质粒非试剂盒抽取，没有把离子浓度调整好，很有可能导致无法酶切，百分之七十的酒精多洗几次再酶切验证试试吧 希望有帮助到卤煮！ |
15楼2013-03-09 12:26:59
2楼2013-03-08 10:48:15
3楼2013-03-08 10:53:31
4楼2013-03-08 10:58:53
5楼2013-03-08 11:08:44
6楼2013-03-08 11:17:11
7楼2013-03-08 11:19:38
9楼2013-03-08 11:23:03
10楼2013-03-08 15:01:22
11楼2013-03-08 18:08:23
12楼2013-03-08 22:04:47
13楼2013-03-08 23:12:46
16楼2013-03-09 20:22:57
简单回复
champ8楼
2013-03-08 11:22
回复
cuicchao(金币+2): 谢谢参与
yingying158814楼
2013-03-09 09:53
回复
cuicchao(金币+2): 谢谢参与
