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cuicchao

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[交流] 奇怪的连接反应

大家好！近来在做目的基因和质粒的连接，在转化时出现了一个奇怪的现象，请教大家分析下。我回收的目的基因和载体都还是比较纯的（用的是OMEGA试剂盒提取的)。我用TAKARA的solution1，16摄氏度，45min连接，之后直接转化DH5阿尔法，我做了全菌的PCR，再提取质粒PCR结果都有正确的结果，但是我跑质粒和双酶切的核算电泳胶都没有条带。这是问什么呢？！！！

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1楼 2013-03-08 10:33:17

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cuicchao

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引用回帖:

11楼: Originally posted by 554526385 at 2013-03-08 18:08:23
菌落PCR结果是不准确的，在你涂的平板上是有很多目的基因片段的，你挑菌之后PCR，即使是空载，也有未连接的目的基因片段做模版的。两个引物分别用载体上的和目的片段上的来做PCR，就会很准确。

“两个引物分别用载体上的和目的片段上的来做PCR。”——你是说将来PCR的结果片段是包含载体一部分碱基，目的基因的一部分碱基。对吗？