| 查看: 1303 | 回复: 5 | ||
ycttfeng木虫 (小有名气)
|
[求助]
很奇怪的连接产物
|
|
最近准备表达蛋白，首先扩增了目的片段，连到Blunt载体（3900多bp）上，测序正确。将目的片段（2200多bp）从Blunt上双酶切后回收，与pET16b（5700多bp）相连，挑了四个单克隆，提质粒双酶切后，总是出现这样的结果：目的片段大小是对的，但载体的大小不对。这到底是为什么为什么呢？已经出现了很多次这样的情况了，一直找不到原因。请各位高手指点 电泳图传不上来 郁闷啊。。。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有127人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上
已经有26人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- pMG36e 构建的奇怪现象
已经有29人回复
- 酶切条带
已经有21人回复
- 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题
已经有19人回复
- 【求助/交流】该死的酶切
已经有6人回复
- 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】连接产物，是否可以直接做PCR模板？
已经有17人回复
- 【求助/交流】PCR产物连接请教！
已经有5人回复
- 【求助/交流】在线等，急！！帮我分析下，连接产物跑胶后有三条！！
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于平末端连接
已经有25人回复
- 【求助/交流】以连接产物做模板扩增此连接产物，有问题请教各位达人~麻烦您帮忙分析下
已经有9人回复
- 【求助/交流】PCR产物与T载体的连接的实验原理？
已经有5人回复
- 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收，为什么回收率太低！
已经有53人回复
rintor
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 103.4
- 散金: 5
- 帖子: 47
- 在线: 27.2小时
- 虫号: 1145045
- 注册: 2010-11-12
- 性别: GG
- 专业: 动物遗传学
2楼2011-12-21 11:48:35
ycttfeng
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3049.5
- 散金: 3958
- 红花: 12
- 帖子: 88
- 在线: 31.1小时
- 虫号: 968870
- 注册: 2010-03-12
- 性别: MM
- 专业: 生物技术药物
3楼2011-12-21 12:26:30
yuxia82012
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 4980
- 散金: 2225
- 红花: 2
- 帖子: 1340
- 在线: 426.5小时
- 虫号: 781881
- 注册: 2009-05-29
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
4楼2011-12-21 15:22:03
yesucao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 3877.1
- 散金: 45
- 红花: 6
- 帖子: 374
- 在线: 203.4小时
- 虫号: 810829
- 注册: 2009-07-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ycttfeng(金币+2): ★★★很有帮助 高人啊！切完后，载体的大小差不多就是3900这样子，接近4000，所以我严重怀疑是Blunt载体，但是想想，我切完Blunt-目的片段后，回收了目的片段那部分啊，所以怎么可能呢。。。。。。百思不得其解。。。。。 2011-12-21 20:25:01
西瓜(金币+3): Good！ 2011-12-21 21:59:23
感谢参与，应助指数 +1
ycttfeng(金币+2): ★★★很有帮助 高人啊！切完后，载体的大小差不多就是3900这样子，接近4000，所以我严重怀疑是Blunt载体，但是想想，我切完Blunt-目的片段后，回收了目的片段那部分啊，所以怎么可能呢。。。。。。百思不得其解。。。。。 2011-12-21 20:25:01
西瓜(金币+3): Good！ 2011-12-21 21:59:23
|
1、建议：单酶切和双酶切同时进行，切1-2h就足够了，不需要切4.5h，看看单酶切的时候总的大小是不是对的？ 2、仔细检查pET16b载体上你选的那两个酶切位点是单一的 3、目前实验你发现酶切后载体变小了，那它现在是多少大小，和5700bp相差多少，和3900bp相差多少呢？？这个仔细看一下 |
5楼2011-12-21 19:01:22
panda73
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 3
- 应助: 80 (初中生)
- 金币: 1201.3
- 散金: 44
- 红花: 2
- 帖子: 191
- 在线: 42.5小时
- 虫号: 985964
- 注册: 2010-03-30
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2011-12-21 21:04:18
40