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ycttfeng

木虫 (小有名气)

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[求助] 很奇怪的连接产物

最近准备表达蛋白，首先扩增了目的片段，连到Blunt载体（3900多bp）上，测序正确。将目的片段（2200多bp）从Blunt上双酶切后回收，与pET16b（5700多bp）相连，挑了四个单克隆，提质粒双酶切后，总是出现这样的结果：目的片段大小是对的，但载体的大小不对。这到底是为什么为什么呢？已经出现了很多次这样的情况了，一直找不到原因。请各位高手指点

电泳图传不上来郁闷啊。。。。。

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努力～

1楼 2011-12-21 10:12:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

ycttfeng

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

楼: Originally posted by rintor at 2011-12-21 11:48:35:
酶切多长时间？你确定载体上没有双酶切位点？

当初回收的时候是切过夜的现在双酶切鉴定切了四个半小时载体上有双酶切位点的啊

努力～

3楼2011-12-21 12:26:30

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