24小时热门版块排行榜    

查看: 1340  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ycttfeng

木虫 (小有名气)

[求助] 很奇怪的连接产物

最近准备表达蛋白,首先扩增了目的片段,连到Blunt载体(3900多bp)上,测序正确。将目的片段(2200多bp)从Blunt上双酶切后回收,与pET16b(5700多bp)相连,挑了四个单克隆,提质粒双酶切后,总是出现这样的结果:目的片段大小是对的,但载体的大小不对。这到底是为什么为什么呢?已经出现了很多次这样的情况了,一直找不到原因。请各位高手指点

电泳图传不上来  郁闷啊。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

努力~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): good 2011-12-22 18:33:18
ycttfeng(金币+1): 2011-12-22 22:13:41
做个空载体的双酶切对照看看
对你发现问题肯定有帮助
6楼2011-12-21 21:04:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

rintor

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
ycttfeng(金币+1): 2011-12-24 09:17:47
酶切多长时间? 你确定载体上没有双酶切位点?
不要轻易言败
2楼2011-12-21 11:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ycttfeng

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by rintor at 2011-12-21 11:48:35:
酶切多长时间? 你确定载体上没有双酶切位点?

当初回收的时候是切过夜的 现在双酶切鉴定切了四个半小时 载体上有双酶切位点的啊
努力~
3楼2011-12-21 12:26:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
ycttfeng(金币+1): 谢谢!确定切开了,我加了没有经过酶切的做了对照 2011-12-21 20:26:48
你确定你是切开了?会不会是根本没切开,电泳出来的是线性质粒和超螺旋的,大的片段亮度要比小片段亮很多,仔细看看
在等待中涅槃重生
4楼2011-12-21 15:22:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 14:03 by GkCVyODlx4mR
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 6/300 2026-08-30 13:54 by GkCVyODlx4mR
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +3 雨打竹帘 2026-08-30 4/200 2026-08-30 12:35 by 白大多亮
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:14 by l0VvVHGBGRLv
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 11:51 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 06:55 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 06:11 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见