应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 奇怪的连接反应
51/1返回列表
查看: 1843  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)

[交流] 奇怪的连接反应

大家好！近来在做目的基因和质粒的连接，在转化时出现了一个奇怪的现象，请教大家分析下。我回收的目的基因和载体都还是比较纯的（用的是OMEGA试剂盒提取的)。我用TAKARA的solution1，16摄氏度，45min连接，之后直接转化DH5阿尔法，我做了全菌的PCR，再提取质粒PCR结果都有正确的结果，但是我跑质粒和双酶切的核算电泳胶都没有条带。这是问什么呢？！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-03-08 10:33:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)
谁有同样的现象分享一下经验吧，做这个转化好久了，苦逼啊！！！
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-08 11:17:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

无为书生

铁虫 (小有名气)
★
cuicchao(金币+2): 谢谢参与
全菌PCR和质粒PCR很可能是你的PCR体系污染了，建议做阴性对照，16度连45min是不是有点短，不要太相信连接酶的说明书了。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-08 10:48:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无为书生 at 2013-03-08 10:48:15
全菌PCR和质粒PCR很可能是你的PCR体系污染了，建议做阴性对照，16度连45min是不是有点短，不要太相信连接酶的说明书了。

不加目的基因和质粒做个阴性对照吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-08 10:53:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无为书生

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cuicchao at 2013-03-08 10:53:31
不加目的基因和质粒做个阴性对照吗？...

不是，其实是每次做PCR时都应该做阴性对照的，就是PCR体系一样，但是模板用超纯水代替，PCR条件之类的也要完全一致。
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-08 10:58:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭